细菌新型生化鉴定管使用说明
――071821 单核增生李斯特氏菌生化鉴定盒（13种×10次）（SN标准）
一）单核增生李斯特氏菌生化鉴定盒（SN标准） 整套试剂及用品
定生化反应的13种试剂（表1）、0.85%无菌生理盐水10瓶、0.5 McFarland的浊度管1瓶、一次性吸管10支。
二）生化管的使用方法
开启西林瓶前，用75%酒精棉消毒西林瓶表面，在无菌条件下，按铝盖上的箭头方向打开铝盖，撕开铝盖，打开西林瓶胶塞（如图1）。所有的西林瓶在使用后均高压灭菌后方可弃去。
三）单核增生李斯特氏菌生化鉴定盒的详细使用方法
挑取选择性培养基上的可疑菌落接种TSA-YE琼脂平板上于35℃纯培养24h后进行菌落颜色、镜检等项目使用。
蓝色菌落检验：用45°光斜射TSA-YE琼脂平板，菌落呈蓝灰色到蓝色。用标准菌株作为阳性对照。将纯培养后的菌落接种于TSB-YE肉汤，35℃培养24h，供生化等项目检验使用。
典型运动镜检：挑取在TSA-YE琼脂平板上生长良好的菌落于洁净载玻片上，李斯特氏菌为革兰氏阳性小杆菌，大小为0.4～0.5µm×0.5～2.0µm；用生理盐水制成菌悬液，在油镜或相差显微镜下观察，该菌出现轻微旋转或翻滚样的运动。
过氧化氢酶试验：挑取TSA-YE平板上的菌落于洁净载玻片上，滴加1滴3%的过氧化氢（H2O2）溶液，李斯特氏菌呈过氧化氢酶阳性反应。
溶血试验：从每个TSA-YE琼脂平板上至少挑取2个菌落刺种血平板，35℃培养24h～48h。
生化鉴定：将TSB-YE肉汤培养物接种于每种微量西林瓶内。将已接种的西林瓶再套上胶塞，一般采用全加塞（如图2左两瓶所示），特殊情况在下表注明采用半加塞（如图2右两瓶所示），直立于内托的凹槽内（如图2），或放置于合适的瓶架中，于35－37℃培养箱中培养，结果观察见表1。
注意：如有特殊的接种方式、培养时间或培养方式，请详见每种生化鉴定管附带的使用说明。
| 表1 | |||||
| 产品名称 | 结果判定 | 培养时间 | 使用说明 | ||
| 阳性 | 阴性 | ||||
| 硝酸盐（还原） | 深红色 | 略带淡粉红色 | 5d | 西林瓶半加塞（如图2右两瓶所示）培养后加硝酸盐还原试剂甲、乙液各2滴，混匀，立即观察结果。 | |
| 3%过氧化氢溶液 | 剧烈起泡 | 无气泡 | -- | 直接滴加在玻片的新鲜菌苔涂片上。 | |
| 葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、木糖、鼠李糖 | 黄色 | 紫色 | 24h—5d | ||
| 葡萄糖磷酸盐胨水（MR） | 红色 | 不变色 | 48h | 西林瓶半加塞（如图2右两瓶所示）培养后加MR试剂2－3滴，立即观察结果。 | |
| 葡萄糖磷酸盐胨水（VP） | 红色 | 不变色 | 48h | 西林瓶半加塞（如图2右两瓶所示）培养后依次加入8滴VP试剂甲液及4滴乙液，混匀，再培养10－20分钟观察结果。 | |
| 尿素 | 桃红色 | 淡橙红色 | 24h—5d | 打开西林瓶胶塞后，向西林瓶中加入所配备的1.5mL/瓶的无菌水，充分溶解。再用接种针挑取新鲜菌苔直接接种于西林瓶内。接种后，置于35-37℃培养箱中培养，逐日观察结果。 | |
| 七叶苷 | 棕黑色 | 不变色 | 24h—5d | ||
| SIM培养基 | 扩散生长，成伞状 | 无扩散生长 | 25℃，2—5d | 用接种针挑取新鲜菌苔穿刺，竖立培育。 | |
| 三糖铁琼脂 | 产气 | 有气泡 | 无气泡 | 24h-5d | 用接种针挑取新鲜菌苔穿刺，穿刺完毕后在斜面上划“之”字形接种，竖立培育。西林瓶半加塞（如图2右两瓶所示）后竖立培育。 |
| 分解蔗糖或乳糖 | 斜面和底层变黄色 | 不变色 | |||
| 分解葡萄糖 | 底层变黄，斜面不变色或者红色加深 | 不变色 | |||
| 产H2S | 变黑色 | 不变色 | |||
| 备注：本鉴定盒是按照环凯产品目录中的品种成份从左到右的顺序摆放。 | |||||
四）单核细胞增生李斯特氏菌的主要生化特性及有关菌的区别见表2。（只供参考）
