【产品名称】
通用名称：哈维氏弧菌（VH）核酸检测试剂盒（PCR荧光探针法）
【产品简介】
哈维氏弧菌核酸检测试剂盒适用于哈维氏弧菌（VH）的检测。
【检测原理】
哈维氏弧菌核酸检测试剂盒基于Real Time PCR技术，利用针对于VH检测的特异性基因ToxR，合成相应的引物和荧光探针，加入其他反应所需试剂以及待检核酸样品，即可进行扩增反应。在发生扩增过程中，荧光探针与目的基因片段结合，可被Taq酶分解并产生荧光信号，此时荧光定量PCR仪可识别该荧光信号，同时根据其强弱变化绘制出相应的实时扩增曲线，进而判定VH是否检出。
【产品组分】
组分名称 | 规格×数量 |
裂解液 | 1 mL×2管 |
阳性对照 | 200 μL×1管 |
阴性对照 | 200 μL×1管 |
预混液 | 1 mL×1管 |
说明书 | 1份 |
【储存条件与保质期】
-20℃储存，有效期为9个月，避免反复冻融。
【灵敏度】
最低检验限：10-100 Copies/Test
【所需其他材料和适用仪器】
荧光定量PCR仪（具有能够检测FAM标记的荧光通道）、高速离心机、移液器、移液枪头及离心管等。
【使用指南】
1. 样品前处理
取适量（如50～100 mg）待检新鲜样品组织研磨，并加入1～5倍体积的生理盐水进行匀浆，取200 μL匀浆液经商品化细菌DNA提取试剂盒提取获得相应的DNA待检样品，可于-20℃条件下暂存、待用。
2. 加样、反应
从试剂盒中取出预混液，充分融化，涡旋后短暂离心，分别进行如下操作。
1) 按照需求取n个PCR反应管（n=1管阴性对照+待检样品数+1管阳性对照），以上每管中分别加入20 μL预混液，待用。
2) 向上述n个反应管中分别加入阴性对照、DNA待检样品、阳性对照各5 μL，盖紧管盖，短暂离心，立即进行PCR扩增反应。
3) PCR反应体系为25 μL，设置FAM检测通道读取，在反应阶段2中60℃时收集荧光信号，具体程序如下：
反应阶段 | 温度 | 时间 | 信号收集 | 循环数 | |
1 | 95℃ | 10 sec | 1 | ||
2 | 95℃ | 5 sec |  | 40 | |
60℃ | 30 sec | √ |
注：对于ABI系列荧光定量PCR仪器，其反应体系中无需添加ROX，且在软件设置时，在“Passive Reference”和“Quencher”处均选择“None”。
3. 结果
一般情况下，可通过软件自动设定的基线、阈值等直接读取检测结果。如需调整，可根据所使用仪器的自身情况（如噪声等）以及选取的不同荧光通道进行调整。
1) 质量控制：
阴性对照未出现明显的S型扩增曲线或Ct值＞37，阳性对照出现S型扩增曲线且其Ct值＜30。若阴阳性对照未同时满足上述条件，则本次检测结果无效，应重新检测或与产品技术支持联系。
2) 结果判读：
① 无Ct值，且未出现典型的S型扩增曲线，为阴性结果，判定为VH未检出；
② Ct值≤37，且出现典型的S型扩增曲线，为阳性结果，判定为VH检出；
③ Ct值＞37，且出现典型的S型扩增曲线，建议重新检测，若重检后Ct值≤37，且出现典型的S型扩增曲线，则判定为阳性结果，反之则为阴性结果。
