产品名称:Bst DNA Polymerase, Large Fragment(with dNTP)
中文名称:Bst DNA聚合酶,大片段(with dNTP)
产品编号与包装规格:
编号 | 产品名称 | 规格 | 产品介绍 | 产品价格 |
HKE015-01A | Bst DNA Polymerase, Large Fragment(with dNTP) | 800U | Bst DNA聚合酶,大片段 | |
HKE015-01B | 800U ×5 | |||
HKE015-02A | Bst DNA Polymerase, Large Fragment | 800U | ||
HKE015-02B | 800U ×5 |
产品描述:Bst DNA聚合酶大片段是Bacillus stearothermophilus DNA聚合酶的一部分,来源于E.coli菌株。利用基因重组技术,在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得。该酶具有5´→3´DNA聚合酶活性, 但不具有5´→3´外切核酸酶活性。本制品可应用于DNA测序、DNA 标记和等温DNA扩增等。
产品特点:
链置换活性强。
高灵敏度。
最佳活性温度为 65℃,恒温扩增,无需热循环仪。
产品用途:
1)富含 GC 序列的 DNA 序列测定;
2)微量(纳克量)DNA 模板的快速测序;
3)随机引物 DNA 标记;
4)双链 DNA 5'突出端补平法标记;
5)可用于等温 DNA 扩增,如环介导等温扩增(LAMP),全基因组扩增(WGA),解旋酶恒温基因扩增(HDA)等。
应用实例:图例)Bst DNA 聚合酶大片段用于LAMP 实验,以 M13 ssDNA 为模板, 以 F3/B3,FIP/BIP 为引物,65℃反应1 小时后,进行琼脂糖凝胶电泳检测。
泳道M:1kb DNA Ladder ;
泳道 1:LAMP 扩增产物。
反应体系(25μL)如下:
10×Bst LF Buffer | 2.5μL |
F3/B3 | 0.2μM(终浓度) |
FIP/BIP | 0.8μM(终浓度) |
甜菜碱 | 1M(终浓度) |
dNTPs | 400μM(终浓度) |
M13 ssDNA 模板 | 2μL |
Bst DNA 聚合酶Large Fragment | 1μL(8U) |
ddH2O | 至 25μL |
保存温度:-20℃。
产品包装(A 包装):
质量保证:经多次柱纯化,SDS-PAGE 胶检测仅可见清晰单一的目的条带,qPCR 方法检测无大肠杆菌 DNA 残留,无核酸内、外切酶污染。
活性定义:65℃条件下,30分钟内使10nmol的dNTPs掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。
10×反应缓冲液:200mM Tris-HCl,100mM (NH4)2SO4,500mM KCl,20mM MgSO4,1% Tween 20,pH8.8。
保存体系:50 mM KCl,10 mM Tris-HCl (pH 7.5),1mM DTT, 0.1 mM EDTA,0.1% Triton X-100 和 50% Glycerol。
反应条件:1×反应缓冲液,65℃温浴。
热失活:80℃,10 分钟。
注意事项:
1)Bst DNA 聚合酶不具有 3´→5´外切酶活性;
2)长期贮存需加入 100μg/mL BSA 或 0.1% Triton X-100;
3)建议反应温度不要超过 70℃;
4)Bst DNA 聚合酶不能用于热循环测序或PCR。