中国工程院食品安全院士团队

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产品名称：Fast Pfu DNA Polymerase(with dNTP)
中文名称：快速Pfu DNA聚合酶(with dNTP)

产品编号与包装规格：

产品描述：本制品是通过采用分子进化技术对普通Pfu酶进行改造而获得的 新型Fast Pfu酶，是新一代的高保真DNA聚合酶。该酶解决了高保真PCR反应中Pfu酶扩增灵敏度低、延伸速度缓慢的难题，能够高效、快速扩增≤6kb片段目的基因片段（最长可达20kb），模板低至0.05ng， 并且在DNA末端补平、全基因合成、引入突变等之中有着很好的应用。

产品特点：
      高保真：保真度高于Pfu酶，为普通Taq酶的50倍。
      快速高效：Fast Pfu扩增速度为普通Pfu酶的数倍，72℃保温30秒可延伸1kb以上。扩增长度可达20kb，能高效扩增≤6kb片段。
      高灵敏：可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出1.2kb特定基因片段，扩增性能显著优于普通Pfu酶。
      独特配方的 5×Buffer：使PCR 扩增反应更加稳定、灵敏、高效。

产品用途：用于要求保真度比较高的PCR反应，包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成、DNA末端补平等，也用于复杂模板， 高GC/AT 模板的扩增。

使用建议：（Fast Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平末端，无3´端"A"突出， 除使用环凯PCR一步定向克隆试剂盒（Cat. No: HKNR001）外， 其它PCR 产物的克隆方案有：）
      1）PCR前引物进行5´端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平末端的载体中。
      2）将产物3´末端加A后再与T载体连接。
      3）由于Fast Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3´端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度，理想的引物长度为20～30mers。另外为了减少由3´→5´外切酶活性引起的引物降解，尽量在冰上配制反应体系，并最后加入Fast Pfu DNA聚合酶。

应用实例：图例一）50μL 扩增体系中，λDNA 为模板，扩增 1kb~20kb 片段。

泳道 M：λ/Hind III DNA Marker； 
泳道 1：1kb；
泳道 2：2kb；
泳道 3：4kb；
泳道 4：6kb； 
泳道 5：8kb；
泳道 6：10kb； 
泳道7：12kb；
泳道 8：20kb

保存温度：-20℃。

产品包装（A 包装）：

活性定义：在74℃条件下，30 分钟内催化 10nmol dNTPs 掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。。

常用反应体系（50μL）：

常用PCR 循环：

注意事项：
      1)对高 GC 含量模板，建议将变性温度提高到 98℃。
      2)对于高 GC 模板，建议配套使用 PCR 增强剂 I（Cat. No: HKE050）和 PCR 增强剂 II（Cat. No: HKE051），或者添加终浓度为 5%-8% DMSO。