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细胞实验注意事项及配制基础培养基操作步骤

发布时间:2023-10-25    浏览次数:428

以下是平台里的科研小姐姐在做细胞实验时积累的一些经验和心得,分享给大家,目的是为了让实验新手小白能够快速上手养细胞。

细胞实验全程注意事项

1. 无菌操作是重中之重!!!细胞培养对无菌条件比较苛刻,实验人在进行整个细胞实验的无菌意识一定要强,否则一个不小心,发生细菌污染,轻则浪费细胞,重则污染整个培养箱。

2. 实验人员进入细胞房前应该换上干净的鞋子、白大褂、手套和口罩。

3. 所有耗材放入工作台前都需用75%酒精进行消毒,双手进入工作台前也需要用75%的酒精进行消毒。

4. 进行实验前应先对工作台进行紫外灭菌30min以上,并将所有需要用到的耗材放到工作台上一起进行紫外灭菌(简称照台)。

5. 使用酒精灯的实验室需要特别注意安全,刚喷洒完酒精的物品不要靠近酒精灯,有生物安全柜的实验室则不需要使用酒精灯。

6. 进行实验前应先用酒精棉擦拭工作台,所有操作都应在靠近酒精灯火焰下方进行(有生物安全柜的则不需要使用酒精灯)。

7. 实验结束后应及时将垃圾处理,再用酒精棉擦拭工作台,对工作台进行紫外灭菌30min以上。

配制基础培养基

以下配制的是基础培养基,主要用于普通细胞的增殖培养,如小鼠RAW264.7巨噬细胞,内含2%的双抗和10%的胎牛血清。个别特殊细胞需要配制特殊的培养基进行培养。

01 准备材料:50mL离心管、封口膜、镊子、移液枪、DMEM培养液、双抗、胎牛血清等。

02 操作步骤:

1. 用移液枪吸取44mL的DMEM培养液,转移至离心管中。注意枪头不要碰到培养液瓶口。

2. 用移液枪吸取1mL的双抗,转移至离心管中,吹打混匀。

3. 用移液枪吸取5mL的胎牛血清,转移至离心管中,吹打混匀。

4. 用封口膜将离心管封口,置于4℃保存。

5. 双抗、胎牛血清置于-20℃长期保存,置于4℃短期保存。

6. DMEM培养液置于4℃保存。

03 注意事项:

1. 配制好的培养基尽快使用,一般可存放三个月左右,放置久了里面的物质可能会失活,培养出来的细胞状态就不这么好了。

2. 使用移液枪时,注意枪头不要碰到任何东西,如果碰到了,不要犹豫马上丢弃。

3. 双抗、胎牛血清应避免反复冻融,可根据需要将其分装保存。

环凯细胞培养基

文章来源:“金信科研公众号,作者~
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