微生物实验室接种灭菌操作正确方法
发布时间：2024-09-18 浏览次数：504
在微生物实验猿们的日常工作中，经常会进行接种方面的工作，但是如何进行接种呢？接种操作需要注意哪些方面呢？小境给大家罗列几种灭菌操作中的正确做法，一起看看：
01 持接种环的手势
以拿笔或毛笔的手势持接种环环柄，以手指固定住接种环柄，一手指和手腕的转动来控制接种环的运动。
02 接种环的灼烧
1.如果接种环上沾有液体或细菌，先将接种环的头靠近火焰外焰但不要深入，要先将环上液体烤干，这样做是为了防止液滴瞬间温度升高飞溅污染周围环境。
2.一般用右手竖直持接种柄（这里提到的接种柄是金属材质，外面套有一段硬质耐热型塑料或胶皮的手持部分），将接种环前段的圆环在火焰外焰中烧红。
3.将接种柄略微倾斜，向左下方刺去，将接种环前段的金属丝从头至基部缓慢通过外焰至完全烧红。烧红时需要注意接种环金属丝不要碰到桌面，切不要灼烧手握的位置。
4.继续向左下方移动，慢慢调整角度，将接种柄在外焰上进行灼烧。接种环沿原路返回，来回往复灼烧几次。
5.将金属丝与接种柄的连接处，用酒精外焰灼烧灭菌。这个连接处由于螺丝纹路较多，表面并非平整光滑， 容易留存微生物，并且在接种操作中，这个部位一般都进入试管或平皿内，所以这个位置的灼烧非常重要。
6.连接处灼烧完以后，最后再将金属丝和接种环烧红一次，退出火焰。
03 持平皿手势
平皿的拿法分两种：手指托法和手掌托法。
手指托法将平皿置于左手中指、无名指和小指上，然后左手食指和拇指分别扣住平皿的边缘，用左手拇指开启平皿盖。手指托法适用于操作人员手比较大的情况。由于靠食指和拇指控制平皿盖。因此开合平皿十分灵活。
手掌托法将平皿置于左手手掌上，左手食指、中指、无名指和小指的第一关节扣住平皿底的边缘。然后用左手拇指将平皿盖向上顶开。这种持平皿的方法适用于操作人员手比较小的情况。但是由于只靠拇指来开合平皿，因此平皿开口无法开的很大。
以上两种持平皿的姿势只是针对直径9cm以下的平皿而言，对于更大直径的平皿，例如直径14cm的平皿。无法用一只手完成持平皿并开合的动作，需要将平皿放在与酒精灯火焰等高的平台上。然后用左手开合平皿。
04 移液管的使用
使用移液管时，严格禁止用口吸取液体。口吸液体会将待移取液体中的病原体吸到口中，十分危险。许多与实验室有关的感染都是经口吸入和食入危险性物质所造成的。口吸液体还会污染操作对象。尽管移液管末端塞有棉花，但是棉花塞并不能有效的过滤微生物。感染性颗粒仍有可能通过它被吸入，当棉花塞塞的很紧时，吸取的时候可能要更用力，反而会导致棉花塞、气溶胶甚至液体被吸出。所以一定要用吸耳球或机械吸气装置进行吸取液体和液体转接的操作。以吸耳球为例具体介绍移液管的移液操作。
1.点燃酒精灯。将盛有待移取液体的容器置于酒精灯火焰周围10cm的距离以内，打开容器。左手持已灭菌的移液管接近顶部的位置，左手拇指、中指和左左手无名指拿住一根已灭菌的移液管，左手食指自然打开，左手食指要处于其指肚能触及移液管顶端的距离范围内。将移液管迅速插入容器液面以下，但不要触及容器底部，右手持捏扁的吸耳球抵在移液管顶部开始吸取液体，控制吸耳球膨胀的速度，防止速度过快引起液体喷出。吸取液体的体积要大于所需的体积。拿开吸耳球，左手食指指肚迅速盖在移液顶端，用力程度以管内液体不流动即可。
2.将移液管竖直拿好，微微调节左手食指，使移液管内液面缓缓下降至所需的液体体积。注意以液面的凹面最低处为准。
3.右手取来盛液体的容器（如试管）。将移液管前端贴目标容器壁。松开左手食指移液管内液体自然流入容器内。
05 移液器的使用
由于移液管使用不便且容易造成污染。因此在有条件的实验室通常使用移液器来移取液体。
移液器规范使用的重要性无论怎么强调都不过分。移液器的使用需要注意：移液器在用完之后，一定要调回至最大量程处，避免移液器内各组件长时间处于弹力压缩状态，影响移液器的精准程度，造成移液器使用寿命缩短甚至损坏；不管设定的液体体积是多少，通常移液器的按钮有两档，吸液时按到第一档，排液时按到底（第二档）；在酒精灯火焰附近操作时避免火焰灼烧到移液器枪杆。移取液体后需保持枪头向下。不得倾斜枪体导致液体倒流；移液器枪体内部存在污染（除非是已灭菌的可灭菌移液器），用于接种时需引起注意。
06 火焰灼烧涂布棒
涂布棒在进行平板涂布操作之前，需要经过火焰灼烧灭菌。
1.将涂布棒弯头的一端浸入酒精，注意不可浸入的太深，手持部分不可浸入或沾上酒精。
2.将涂布棒取出，至酒精不再下滴的时候置于酒精灯的外焰进行灼烧。注意蘸后不要过度倾斜涂布棒防止酒精沿涂布棒的柄倒流引燃到手。
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