速来！师兄教你如何显著提高冻存细胞复苏成活率
发布时间：2025-01-13 浏览次数：34
一、提高冻存细胞复苏成功率
1.使用适当的冷冻保护剂：常用的冷冻保护剂如二甲基亚砜（DMSO）能够有效减少冰晶形成，保护细胞免受渗透压变化的损害。
2.控制冷冻速率：坚持“慢冻快融”原则，使用梯度降温盒或手动梯度降温，将细胞以-1°C至-2°C/分钟的速率降温至-80°C，然后转移至液氮中长期保存。
3.选用合适的冷冻容器：使用耐低温的不易破裂的冻存管，确保其适合长期冷冻保存细胞。
4.细胞数量适量：冻存前避免细胞过度浓缩，以减小机械压力。每个冻存管中的细胞数量不宜过少，便于复苏到6cm皿或T25培养瓶中培养。
5.记录详细信息：在冻存管上清晰标记细胞类型、冻存日期和细胞密度，以便于稍后追踪和使用。
6.避免反复冻融：冻存和复苏过程中尽量避免反复冻结和解冻，以保持较高的细胞存活率。
7.复苏时快速升温：复苏时，应迅速将冻存管从液氮中取出，并在37°C水浴中快速解冻，减少细胞在冰点附近的停留时间。
8.使用恰当的复苏介质：复苏细胞时，应使用与冻存时相同或相似的培养基，以维持细胞的生理状态。
9.彻底去除冻存液：将解冻后的细胞用培养基稀释，离心去除冻存液，然后用培养基重悬后继续培养，以保护细胞并促进其健康复苏。
二、冻存细胞复苏步骤
① 弃去细胞培养基并PBS洗涤：先弃去培养基，然后用PBS缓冲液洗涤细胞一遍，确保去除残留培养基。
② 胰酶消化：消化时间不宜过长，当观察到部分细胞如流沙状慢慢脱落时，可中止消化以避免过度影响细胞完整性。
③ 离心并重悬细胞：离心后，用移液枪吸去上清，然后用事先准备好的冻存液重新悬浮细胞。
④ 冻存液配方：常用比例为DMSO:血清=12:7或1:9。确保冻存液能有效保护细胞。
⑤ 标记冻存管：在冻存管上详细标记细胞系、使用的培养基、冻存者姓名以及年份和日期，以便将来检索和使用。
⑥ 使用程序降温盒：使用程序降温盒以缓慢降温，能提升细胞存活率。建议将细胞在-80℃下保存24小时后再转移至液氮中进行长期储存。
文章来源：环凯（官网：huankai.com）转载于“Dr实验助手 ”公众号；原作者~实验轶。
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