细胞慢病毒转染预实验方案分享
发布时间：2025-02-24 浏览次数：259
1.预实验目的：确定慢病毒对细胞的感染MOI和最佳的感染条件，为正式实验提供参考，如感染试剂的选择，感染时的总体积感染后换液的时间等。
2.预实验分组：按照不同培养条件将实验分为4组。分别为：
Ⅰ、Control组(C组)：监控实验过程中细胞生长是否正常（加入完全培养基，不含病毒和助转染试剂）
Ⅱ、接毒组(M组)：观察常规培养条件下病毒对细胞的感染效果（首先用阴性对照（NC）病毒来摸条件，加入一定量的完全培养基和病毒液）
Ⅲ、病毒液+HiTransG A（助转染试剂）组(A组)：观察HiTransG A是否可以提升感染效果（完全培养基+HiTransG A+NC病毒液）
Ⅳ、病毒液+HiTransG P（助转染试剂）组(P组)：观察HiTransG P是否可以提升感染效果（完全培养基+HiTransG P+NC病毒液）
3.预实验操作方案
3.1.贴壁细胞
Day1:接种细胞：用完全培养基制备3ml密度为3~5×104个/ml细胞悬液。具体细胞密度可根据实验所用的细胞生长情况及大小进行调节，取100µl加入96孔板中，共16个孔，其中3个孔作为Control组，37°C 培养16-24h，至细胞汇合度为20-30%（也可直接铺板时时直接铺20-30%的细胞,，贴壁较快的细胞等待4-6h及可进行接毒）对于大部分细胞，我们通常认为培养24h后细胞数量是铺板时数量的两倍,每孔细胞数量约1W。
Day2：感染
Ⅰ、从冰箱取出病毒，冰上融化。用完全培养基依次将病毒稀释至滴度1x10^8 TU/ml， 5x10^7TU/ml， 2.5x10^7TU/ml, 1x10^7TU/ml，稀释完成后每组最少35µl。
Ⅱ、吸掉各孔中上清液，按照表1更换培养基， 加入病毒及相应感染增强液， 混匀，继续培养。感染后16-24h用完全培养基进行换液，过程中观察细胞形态，发生变化时可以提前到8h换液， 保持细胞正常生长。
表1.预实验分组及感染
Day3-4：继续培养：中途可根据细胞的生长状况进行换液，保持细胞活性。
Day5：感染效果确认：感染约72-96h，荧光表达丰度较高时，用显微镜观察。感染效率80%左右，且细胞生长良好的组所对应的感染条件和MOI即可以作为后续感染实验的依据。
3.2.悬浮细胞
相对于贴壁细胞，悬浮细胞在第一天即可完成接种和感染操作，且接种细胞数量需在1W左右 cells/孔，接种时同时感染病毒，感染8-24h，根据细胞生长情况进行加液操作，无需换液，以免损失细胞。其余操作同贴壁细胞。
3.3.半悬半贴细胞
实验方案：略。建议参考悬浮细胞操作方案进行。
注解：
MOI: 复感染指数，是指病毒对细胞的感染能力，MOI越高，细胞越难被感染。通常把某株细胞有80%被感染时所用的病毒颗粒数和细胞数目的比值作为该株细胞的MOI。
MOI=（病毒滴度 × 病毒体积） / 细胞数目
HitransG A ：吉凯基因自主研发的病毒感染增强液。它的主要成分是一种新型的高分子非离子表面活性剂，同时也是一种细胞保护剂和促进吸收剂。它可以通过提高细胞表面活性，增加病毒与细胞的接触面积，促进病毒高效感染细胞，且对细胞毒性极低，适合敏感细胞使用。
HitransG P：吉凯基因自主研发的病毒感染增强液。它的主要成分是一种阳离子聚合物，通过抑制细胞膜与病毒之间的电荷排斥， 增加慢病毒对细胞的感染效率。本产品可以极大提高细胞感染效率，且细胞毒性显著低于Polybrene。
参考资料：GE042.6重组慢病毒载体使用手册
文章来源：环凯转载于“ 爱吃洋芋的酸菜鱼”公众号；原标题：“细胞慢病毒转染预实验方案分享”；作者~ GAPDH。
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