环凯生物酶底物法检测系统(含质控样)
—GB/T5750-2023《 生活饮用水标准检验方法》酶底物法
—HJ1001-2018《 水质 总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定酶底物法》
一、相关产品特点
适用性广/可靠度高
依据GB/T5750-2023《生活饮用水标准检验方法》和HJ1001-2018《水质总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定酶底物法》中的酶底物法检测培养基要求，环凯生物自主研发了酶底物法专用的MMO-MUG培养基。该培养基通过了对100株包含大肠菌群、大肠埃希氏菌或粪(耐热)大肠菌群(包括从水样分离的菌株和标准菌株)的验证，结果显示其特异性高,阳性菌株特征明显，无假阴性情况。培养基的灵敏度高，可精确检出低至1MPN/100 mL水样中的大肠菌群和大肠埃希氏菌或粪(耐热)大肠菌群活菌，并且对水样中常见的非大肠菌群(包括酶底物假阳性菌株)具有明显的抑制作用。产品已通过超200份样品的测试,涵盖生活饮用水、地表水、地下水、生活污水和工业废水等多个领域。
为了满足客户的方法验证、培养基适用性验证、阳性对照和定量检测等需求，环凯生物推出了可追溯的质控样。产品结果显示底物或荧光底物特异性高，通过抑菌剂有效抑制其他异养菌，能够准确检测出水样中的大肠菌群和大肠埃希氏菌或粪(耐热)大肠菌群活菌。通过颜色或荧光判读结果,阴阳性区分明显。
操作简单/检验周期短
只需4步即可完成检测，平均每分钟可检测一份样品。
检验周期只需24小时，无需验证试验。
二、产品检测原理
总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌能产生B-半乳糖苷酶，使培养基中的无色底物邻硝基苯β-D-吡喃半乳甘糖分解黄色的邻硝基苯酚，其中大肠埃希氏菌还能同时产生β-葡萄糖醛酸酶，使培养基中的4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸酶分解为-甲基伞形酮，在紫外灯照射下产生荧光。在36±1℃经培养后培养孔变黄的为总大肠菌群；培养孔变黄并伴有荧光的为大肠埃希氏菌；44.5C培养后培养孔变黄的为粪大肠菌群，变黄并有荧光的为大肠埃希氏菌。统计阳性反应出现的数量，对照MPN图表，分别计算出总大肠菌群，粪大肠菌群，大肠埃希氏菌的浓度值。
酶底物法检测系统(含质控样)技术参数
—— 水中大肠菌群检测酶底物法产品系列(含质控包)技术参数
饮用水、地表水、污水检测
—— 适用于自来水系统、疾病预防控制中心、进出口检验检疫系统、第三方检测实验室、环境监测站、污水处理厂、水文站等系统
符合GB/T5750-2023《生活饮用水标准检验方法》酶底物法(MMO-MUG)和HJ1001-2018水质总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定酶底物法》培养基要求
一、定量操作
1、无颜色变化：阴性
2、如果是36±1℃培养24小时：黄色孔格数对照MPN表得到总大肠菌群检测结果；黄色且荧光的孔格数对照MPN表得到大肠埃希氏菌检测结果
3、如果是44.5°C培养24小时：黄色孔格数对照MPN表得到耐热大肠菌群检测结果
二、定性操作
将100mL水样加入100mL无菌取样瓶中，向瓶中加入环凯的MMO-MUG培养基，轻摇瓶子确保培养基完全溶解后，放入培养箱内培养24h。
1、无颜色变化：阴性
2、颜色变黄：总大肠菌群阳性
3、颜色变黄且观察到荧光(使用366nm紫外灯照射显黄色的取样瓶，呈现明显荧光)：大肠埃希氏菌阳性
三、10管法操作
《GB5750.12-2023》酶底物法中对10管法的操作描述如下：
将100mL水样加入100mL无菌取样瓶中，向瓶中加入环凯的MMO-MUG培养基，轻摇瓶子确保培养基完全溶解；
准备10支无菌试管，用无菌吸管从上述水样瓶中分别吸取10mL水样至各试管中，放入培养箱中培养24h。
1、如果是36±1℃培养24小时：黄色管数对照MPN表得到总大肠菌群检测结果；结果读取：黄色且荧光的管数对照MPN表得到大肠埃希氏菌检测结果；
2、如果是44.5℃培养24小时：黄色管数对照MPN表得到耐热大肠菌群检测结果。请查阅GB5750.12-2023酶底物法10管法MPN表获取检测结果。
质量控制体系（质控样）
—— 请在专业技术人员指导下完成
意义：
● 符合GB27043-2012合格评定能力验证的通用要求，符合CNAS-CL01-A001-2022对微生物实验室的要求；
● 用于识别培养基、设备、方法是否准确及评估操作人员的能力和确认其资格；
● 检测测量方法的有效性。
操作步骤
01、准备1个空的无菌瓶(>300 mL) 和300mL 稀释液(无菌水或无菌PBS 缓冲液)。
02、将质控样冻干粉从冰箱中取出，置于室温10~15分钟平衡温度。
03、打开质控冻干粉，加入稀释液3mL溶解冻干粉，待充分溶解后全部转移到无菌瓶中。
04、加少量的稀释液冲洗冻干粉瓶，回收所有质控样菌悬液到无菌瓶中，将剩余的稀释液倒入，充分振荡确保均匀，总体积为300mL。
05、每个质控样冻干粉的量可做3个平行实验，将质控样悬液倒入取样瓶，每瓶定容到100mL 刻度。
06、将MMO-MUG 培养基倒入每个含质控样取样瓶中，混匀。将所有混合液倒入97孔定量盘中并封膜，在36±1°C培养24小时。
07、判读：黄色孔格为总大肠菌群阳性，黄色且显荧光为大肠埃希氏菌阳性，对照MPN表定量计数。
