【手把手教学】配置细胞完全培养基
发布时间：2025-11-25 浏览次数：8
本篇指南的使命，是教会你如何配制一份合格的、可用于细胞培养的完全培养基（以最常见的“DMEM + 10% FBS + 1% P/S”为例）。
更重要的是，咱们要直面那个在无数实验室里引发过“友好”辩论的核心问题——配制“10% FBS培养基”时，到底该怎么加？
通过这篇教学，你不仅能掌握操作，还能理解不同方法背后的逻辑，从而做出最适合自己实验的选择。
细胞在体外培养，就像是住进了一个需要精心维护的“高级公寓”。
基础培养基 (Basal Medium)，比如DMEM或RPMI-1640，提供了公寓的“基本框架”：水、无机盐、氨基酸、维生素和葡萄糖，维持细胞最基本的生存。
但要让细胞健康生长、增殖，还需要“豪华装修”——也就是胎牛血清 (FBS)。它像一个营养大礼包，富含生长因子、激素和其他未知但至关重要的蛋白，是绝大多数细胞的快乐源泉。
那么问题来了，经典的“10% FBS”到底指的是什么？
从化学配制的角度，10% (v/v) 意味着在最终的总体积中，有10%的体积来源于FBS。
让我们来算笔账（以500mL基础培养基为例）：
- 做法一（图方便）: 500mL基础培养基 + 50mL FBS = 550mL 终体积。此时FBS浓度 = 50 / 550 ≈ 9.1%。
- 做法二（追求精确）: 450mL基础培养基 + 50mL FBS = 500mL 终体积。此时FBS浓度 = 50 / 500 = 10.0%。
咱们今天的实验，将重点围绕这两种主流操作展开，并给出我们的推荐做法。
| 核心试剂 | ||
| 仪器与耗材 | ||
准备工作：万事开头“净”
将所需的所有物品（培养基、FBS、P/S、移液管等）用75%酒精彻底擦拭表面后，移入已开启并清洁过的生物安全柜中。
将冻存的FBS和P/S在37°C水浴锅中解冻。注意，水面不要超过瓶盖，防止污染。
解冻过程中要不时轻柔摇晃混匀，尤其是FBS，避免局部过热导致蛋白沉淀。完全融化后，酒精擦拭瓶身，放入安全柜。
⚠️ 无菌操作是生命线!
整个配制过程，你的双手和所有操作都必须在生物安全柜内进行。
任何一个环节的疏忽，都可能导致你的细胞“团灭”。
核心步骤：配制完全培养基 (推荐方法)
虽然图方便直接往整瓶500mL培养基里加料的方法很普遍（我承认我刚进实验室时也见这么干过），但为了实验的严谨性和可重复性，我们强烈推荐以下“精确配制法”。
从一瓶全新的500mL基础培养基中，用无菌移液管吸出55mL。这55mL可以暂时放一边，或者收集起来用于配制无血清培养基等其他用途。
现在瓶中还剩 500 - 55 = 445mL 基础培养基。向这瓶培养基中加入以下成分：
这样，终体积为 445 + 50 + 5 = 500mL，完美！
混合、分装与储存
拧紧瓶盖，用手腕的力量轻柔地颠倒混匀10-15次。避免剧烈摇晃产生大量泡沫，那会使蛋白变性。
在瓶身上用记号笔清晰地标记好：培养基名称 (如DMEM)、添加物及浓度 (10% FBS, 1% P/S)、配制日期、你的姓名缩写。
用封口膜（Parafilm）将瓶口密封，放入4°C冰箱避光保存。
