PCR模板溶解为什么用2mol/L NaCl而非蒸馏水?DNA缓冲液防降解原理
发布时间:2026-06-26 浏览次数:46
当PCR仪的荧光信号开始跃动,数以亿计的DNA舒展成待扩增的完美模板,在这场"魔法秀"中,用的为什么不是蒸馏水,而是2mol/L NaCl溶液?毕竟很多实验中都要用到物美价廉的蒸馏水,为什么在这里就不适用呢?
01,为什么不是蒸馏水?
先来说说DNA缓冲液(buffer)的作用。溶解DNA只是最基本的一种作用,DNA可以溶解于很多溶液中,包括那些有机溶剂。但是,之所以选择用缓冲液来保存而不是水,主要是防止DNA的降解。
DNA是带电的高分子(否则你也无法跑电泳了),所以,对于带电的物质,维持电荷稳定才是最关键的,否则就容易降解。
这就是为什么我们会选择缓冲液来溶解DNA,因为缓冲液里有大量的电荷,且可以维持一个ph值较为稳定的范围(ph和电的关系不需要解释吧?)
02,缓冲液存在的意义
结合以上的内容,你应该知道,保存DNA,最关键的因素是
1,ph稳定(所以必须用缓冲液)
2,没有DNA酶
符合以上条件的,且常用的,就是大名鼎鼎的TRIS-HCL缓冲液,成分是Tris(C4H11NO3),HCL。调整ph一般用的是NaOH和HCL。
而NaCl,就是上述缓冲液的一种成分(HCL+NaOH=NaCL+H2O)。当然,如果是短时间使用,且不需要保存的话,直接用水也没任何问题。
最后,附上缓冲液的定义:当往某些溶液中加入一定量的酸和碱时,有阻碍溶液pH变化的作用,称为缓冲作用,这样的溶液叫做缓冲溶液。英文名是buffer。这个名字,我觉得是生物试剂里最有趣的一个。
最后,buffer是一个很有用的东西,几乎所有试验都用得到。因为实验的敏感性,如果不缓冲,你可能提不到东西或者提到一堆碎片。
