平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在37℃温度下培养，1~2天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。

　　每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小，表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，颜色以及质地疏松或紧密等。因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。

微生物检测材料

微生物

试剂、试剂盒

　　肉膏蛋白胨琼脂

仪器、耗材

　　灭菌棉签　　接种环　　试管架　　酒精灯

实验步骤

1.写标签

　　任何一个实验，在动手操作前均需首先将器皿用记号笔做上记号，培养皿的记号一般写在皿底上。如果写在皿盖上，同时观察两个以上培养皿的结果，打开皿盖时，容易混淆。用记号笔写上班级、姓名、日期，本次实验还要写上样品来源(如实验室空气或无菌室空气或头发等)，字尽量小些，写在皿底的一边，不要写在当中，以免影响观察结果。

2.实验室细菌检查

　　(1)空气将一个肉膏蛋白胨琼脂平板放在当时做实验的实验室，移去皿盖，使琼脂培养基表面暴露在空气中;将另一肉膏蛋白胨琼脂平板放在无菌室或无人走动的其他实验室，移去皿盖。一小时后盖上两个皿盖。

　　(2)实验台和门的旋钮

　　①用记号笔在皿底外面中央画一直线，再在此线中间处画一垂直线。

　　②取棉签左手拿含有棉签的试管，在火焰旁用右手的手掌边缘和小指、无名指夹持棉塞(或试管帽)，将其取出，将管口很快地通过煤气灯(或酒精灯)的火焰，烧灼管口;轻轻地倾斜试管，用右手的拇指和食指将棉签小心地取出。放回棉塞(或试管帽)，并将空试管放在试管架上。

　　③弄湿棉签左手取灭菌水试管，如上法拔出棉塞(或试管帽)并烧灼管口，将棉签插入水中，再提出水面，在管壁上挤压一下以除去过多的水分，小心将棉签取出，烧灼管口，放回棉塞(或试管帽)，并将灭菌水试管放在试管架上。

　　④取样将湿棉签在实验台面或门旋钮上擦拭约2平方厘米的范围。

　　⑤接种，A在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿开启成一缝。再将棉签伸入，在琼脂表面顶端接种(滚动一下)，立即闭合皿盖。将原放棉签的空试管拔出棉塞(或试管帽)，烧灼管口，插入用过的棉签，将试管放回试管架。

　　⑥划线另取接种环在火焰上灭菌，先将环端烧热，然后将接种环提起垂直放在火焰上，以使火焰接触金属丝的范围广一些，待接种环烧红，再将接种环斜放，沿环向上，烧至可能碰到培养皿的部分，再移向环端，如此很快地来回通过火焰数次。

　　左手拿起平板，同样开启一缝，将灭过菌并冷却了的接种环(可在琼脂表面边缘空白处试温度，若发出溅泼声，表示太烫)，通过琼脂顶端的接种区，向下划线，直到平板的一半处。注意：接种环与琼脂表面的角度要小，移动的压力不能太大，否则会刺破琼脂。

　　闭合皿盖，左手将平板向左转动至空白处，右手拿的接种环再在火焰上烧灼，使冷。接种环通过前面划的线条再在琼脂的另一半，从上向下来回划线至1/2处。

　　烧灼接种环，转动平板，划最后1/4，立刻盖上皿盖，烧灼接种环，放回原处。整个划线操作均要求无菌操作，即靠近火焰，而且动作要快。

3.人体细菌的检查

　　(1)手指(洗手前与洗手后)

　　①分别在两个琼脂平板上标明洗手前与洗手后(当然，班级、姓名、日期各项在每次写标签时是必不可少的)。

　　②移去皿盖，将未洗过的手指在琼脂平板的表面，轻轻地来回划线，盖上皿盖。

　　③用肥皂和刷子，用力刷手，在流水中冲洗干净，干燥后，在另一琼脂平板表面来回移动，盖上皿盖。

　　(2)头发：在揭开皿盖的琼脂平板的上方，用手将头发用力摇动数次，使细菌降落到琼脂平板表面，然后盖上皿盖。

　　(3)咳嗽：将去盖琼脂平板放在离口约6~8 cm 处，对着琼脂表面用力咳嗽，然后盖上皿盖。

　　(4)鼻腔

　　①按照实验台检查法的步骤②和③，取出棉签，并将其弄湿。

　　②用湿棉签在鼻腔内滚动数次。

　　③按实验台检查法的步骤④和⑤，接种与划线，然后盖上皿盖。

4.将所有的琼脂平板翻转，使皿底在上，放37℃培养箱，培养1~2天。

5.结果分析

　　(1)菌落计数在划线的平板上，如果菌落很多而重叠，则数平板最后1/4面积内的菌落数。不是划线的平板，也一分为四，数1/4面积的菌落数。

　　(2)根据菌落大小、形状、高度、干湿等特征观察不同的菌落类型。但要注意，如果细菌数量太多，会使很多菌落生长在一起，或者限制了菌落生长而变得很小，因而外观不典型，故观察菌落的特点时，要选择分离得很开的单个菌落。

菌落特征描写方法

　　①大小大、中、小、针尖状。可先将整个平板上的菌落粗略观察一下，再决定大、中、小的标准，或由教师指出一个大小范围。

　　②颜色黄色、金黄色、灰色、乳白色、红色、粉红色等。

　　③干湿情况干燥、湿润、粘稠。

　　④形态圆形、不规则等。

　　⑤高度扁平、隆起、凹下。

　　⑥透明程度透明、半透明、不透明。

　　⑦边缘整齐、不整齐。