071800 蜡样芽胞杆菌胞杆菌生生化鉴定盒(8种×10次)
一)整套试剂及用品
鉴定生化反应的8种试剂(表1)、8瓶0.85%无菌生理盐水、1瓶1McFarland的浊度管、8支一次性吸管。
二)生化管的使用方法
开启西林瓶前，用75%酒精棉消毒西林瓶表面，在无菌条件下，按铝盖上的箭头方向打开铝盖，撕开铝盖，打开西林瓶
胶塞(如图1)。所有的西林瓶在使用后均高压灭菌后方可弃去。
三)蜡样芽胞杆菌生化鉴定盒的详细使用方法
蜡样芽胞杆菌为革兰氏阳性大杆菌，宽度在1µm或1µm以上，芽胞呈卵圆形，不突出菌体，多位于菌体中央或稍偏于一端。
能产生卵磷脂酶和酪蛋白酶，不发酵甘露醇和木糖。在MYP平板上为粉红色菌落，周围有粉红色的晕;在酪蛋白琼脂上菌落周
围有透明圈。本菌在肉汤中生长浑浊，常微有菌膜或壁环，振荡易乳化，在普通琼脂平板上生成的菌落不透明、表面粗糙、似
毛玻璃状或融腊状、边缘不齐。
将待试品用10倍梯度稀释法稀释至合适的浓度，MYP平板分离，37℃培养12～20小时，将疑似蜡样芽胞杆菌的新鲜菌苔
置于无菌生理盐水中，以1 McFarland的浊度管为标准对照，制备成1McFarland (约3.0×108cfu/mL )菌悬液，往每种微量生化
管内滴加2滴(约0.06mL)菌悬液。将已接种的西林瓶再套上胶塞，一般采用全加塞(如图2左两瓶所示)，特殊情况在下表
注明采用半加塞(如图2右两瓶所示)，直立于内托的凹槽内(如图2)，或放置于合适的瓶架中，于35-37℃培养箱中培养，
结果观察见表1。
注意：如有特殊的接种方式或培养时间，请详见每种生化鉴定管附带的使用说明。
四)蜡样芽胞杆菌的生化分型和鉴定特征 (只供参考)
1. 蜡样芽胞杆菌可根据对柠檬酸盐利用、硝酸盐还原、淀粉水解、V-P反应、明胶液化性状的试验，将该菌分成不同的型别。
本菌在生化性状上与苏云金芽胞杆菌极为相似，但后者可藉细胞内产生蛋白质毒素结晶体加以鉴别。其方法如下：取经30±1℃培养24±2h并于室温放置3～4天的营养琼脂(022022），适用于芽胞杆菌蛋白质毒素结晶体的形成)培养物少许于载玻片上,滴加蒸馏水混匀并涂成菌膜。经自然干燥,微火固定后,加甲醇作用30秒后倾掉,再通过火焰干燥,于载玻片上滴满0.5%碱性复红液,放火焰上加热微见蒸气(勿使染液沸腾)后持续1.5分钟,移去火焰,更换染色液再次加温染色30秒，倾去染液用自来水彻底清洗、晾干后油镜镜检。观察有无游离芽胞和染成深红色的菱形、正方形或其它性状的蛋白质毒素结晶体(如发现游离芽胞形成的不丰富,应将培养物置室温2～3天再行检查)，如有即为苏云金芽胞杆菌，蜡样芽胞杆菌检查为阴性。
