大肠埃希氏菌O157:H7/NM生化鉴定盒(GB/T 4789.36-2008, 13种×10次)
一)整套试剂及用品
鉴定生化反应的13种试剂(表1)、10瓶0.85%无菌生理盐水、1瓶0.5 McFarland的浊度管、10支一次性吸管。
二)西林瓶的使用方法
开启西林瓶前,用75%酒精棉消毒西林瓶表面,在无菌条件下,按铝盖上的箭头方向打开铝盖,撕开铝盖,打开西林瓶胶塞(如图1)。所有的西林瓶在使用后均高压灭菌后方可弃去。
三)大肠埃希氏菌O157:H7生化鉴定盒的详细使用方法
大肠杆菌O157:H7为革兰氏阴性杆菌,需氧或兼性,有周鞭毛,并有菌毛,不产生芽孢的杆菌。发酵乳糖,不发酵或迟缓发酵山梨醇;氧化酶阴性;MUG阴性。
从分离培养平板上挑取可疑菌苔接种于营养琼脂平板上分纯,于35-37℃培养18-24h,挑取菌落置于已配备的无菌生理盐水中,与0.5 McFarland的浊度管比浊,将菌悬液制备成0.5McFarland ( 约108cfu/mL ),用吸管吸取2滴(约0.06mL)菌悬液加入每种微量生化管内。将已接种的 西林瓶再套上胶塞,一般采用全加塞(如图2左两瓶所示),特殊情况在下表注明采用半加塞(如图2右两瓶所示),直立于内托的凹槽内(如图2),或放置于合适的瓶架中,于35-37℃培养箱中培养,结果观察见表1。
注意:如有特殊的接种方式、培养时间或培养方式,请详见每种生化鉴定管附带的使用说明。
备注:本鉴定盒是按照环凯产品目录中的品种成份从左到右的顺序摆放。
四)出血性大肠杆菌O157:H7的生化鉴定程序(见下图)和生化鉴定特征(见表2)
出血性大肠杆菌O157:H7生化鉴定程序图:
在营养琼脂平板上挑取分纯的菌落,用 O157:H7标准血清或 O157乳胶凝集试剂测试,对于H7因子血清不凝集者,应穿刺 接种半固体琼脂,检查动力,经连续传代3次,动力试验阴性,H7因子血清凝集阴性者,确定为无动力株。