中国工程院食品安全院士团队

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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(Methicillin-resistant coagulase-negative staphylococci, CoNS)是医院环境中的重要问题。MRSA和CoNS一直是导致卫生保健相关感染的前五大病原体。在一些机构中，25%至50%的金黄色葡萄球菌和高达75%的金黄色葡萄球菌分离株对甲氧西林（Methicillin）或苯唑西林（Oxacillin）耐药。这些分离株对目前所有可用的β-内酰胺抗菌剂以及β-内酰胺/β-内酰胺酶抑制剂组合（β-lactam antimicrobials and β-lactam/β-lactamase inhibitor combinations）具有耐药性，但一些具有抗MRSA活性的新头孢菌素（Cephalosporins）除外。因此，万古霉素（Vancomycin）常被用作葡萄球菌感染的经验性治疗。因此，正确检测这些分离株的耐药性对治疗管理至关重要。头孢西丁（Cefoxitin）可用于筛选葡萄球菌mecA介导的耐药，并且由于提高了检测mecA介导的耐药的敏感性和特异性，常被用作苯唑西林在金黄色葡萄球菌（S. aureus）、卢顿葡萄球菌（S. lugdunensis）、表皮葡萄球菌（S. epidermidis）和其他一些葡萄球菌中的替代品。值得注意的是，苯唑西林圆盘试验（Oxacillin disk testing）只对指定的品种是可靠的，不应该用于金黄色葡萄球菌。然而，对于某些葡萄球菌物种，如假中间葡萄球菌（S. pseudintermedius），苯唑西林是耐药性最可靠的预测因子。除了传统的表型抑制测试（Traditional phenotypic inhibitory testing）外，还有其他几种常规方法用于检测和区分分离细菌和临床标本中MRSA的存在。显色培养基（Chromogenic media），比如在MRSA的情况下，选择头孢西丁耐药菌株并根据菌落的存在和颜色将金黄色葡萄球菌与其他物种区分开来，经常用于MRSA监测。当从无菌地点分离出肺炎链球菌（S. pneumoniae）时，必须进行药敏试验。可采用oxacillin筛片扩散法（Oxacillin screen disk diffusion method），分离物抑菌区≥20 mm，说明该分离物对青霉素（Penicillin）敏感。此外，在Penicillin筛检上小于19mm的区域需要使用MIC方法进行额外的测试，因为这种大小的区域抑制可能出现在对青霉素耐药、敏感或中间的分离株中。因此，当从某一来源(如脑膜炎、血液)获得分离物时，延迟药敏试验可能有潜在危险，直接进行MIC检测可能是最有效的。最低抑菌浓度(The minimum inhibitory concentration，MIC)定义为抗生素在体外抑制生物体可见生长的最低浓度。对于肺炎链球菌或肠球菌以外的链球菌，需要检测和报告的抗菌剂取决于种类。只有当患者对青霉素过敏并考虑用大环内酯类药物/利可沙胺治疗时才需要进行检测，因为B群链球菌引起的感染已显示对克林霉素（Clindamycin）有40%的耐药性，对红霉素（Erythromycin）有50%的耐药性。对红霉素耐药但对克林霉素敏感的分离株应检测由erm基因介导的克林霉素“诱导性”耐药，使用微量肉汤稀释（Broth microdilution or the ）或D区近似试验（D-zone approximation test）。只报告克林霉素的结果。“诱导型”克林霉素耐药也可发生在葡萄球菌、β溶血性链球菌和肺炎链球菌中。不同地理区域的患病率可能不同。对于绿链球菌（viridans streptococci），任何从无菌身体部位分离出来并涉及严重感染(如心内膜炎或败血症)的分离株，都应检测青霉素或氨苄西林（Ampicillin）的敏感性。青霉素和氨苄西林扩散试验的解释标准不适用于翠绿链球菌，因为该方法是不可靠的病原体-抗菌药物组合。因此，使用MIC方法辅助完成测试。翠绿链球菌是重要的致病菌，可引起中性粒细胞减少症和先天性瓣膜心内膜炎患者的脓毒症。表型法——包括肉汤稀释（Broth dilution）、琼脂稀释（Agar dilution）、圆盘扩散（Disk diffusion）和梯度扩散（Gradient diffusion）——是目前最普遍的，在许多情况下也是最经济有效的完成药敏试验的方法。基于表型方法的商业操作系统减少了检测抗生素耐药性表达所需的劳动和时间，并在许多实验室中使用。最后，更新的检测方法，如分子检测，其中一些可以直接在患者标本上进行，由于它们消除了与病原体分离相关的延迟，已与常规检测相结合。

Figure 1. Disk induction （derived from McPherson, R. A., & Pincus, M. R. 2021）

参考文献：McPherson, R. A., & Pincus, M. R. (2021). Henry's clinical diagnosis and management by laboratory methods E-book. Elsevier Health Sciences.

来源：微生物安全与健康网，作者~苏悦