细胞培养过程细胞计数仪活率准确性验证合规说明

问：在细胞培养过程中如何验证计数仪的细胞活率准确性？需要考虑不同的细胞类型分别验证吗，验证频次为一次即可还是需要定期执行再确认？

在细胞培养过程中验证计数仪的细胞活率准确性，是一项确保细胞产品质量与工艺稳定性的关键活动。这并非简单的设备校准，而是涉及分析方法确认、设备性能验证及持续监控的综合体系。核心原则是，活率检测作为一项关键的分析方法，其准确性验证应遵循分析方法验证与设备确认相结合的逻辑，并基于风险评估确定验证策略与频次。

一、细胞活率计数准确性验证本质：活率检测方法学确认要求

验证计数仪的细胞活率准确性，其本质是对“活率检测方法”的确认。这需要从方法学验证的角度出发，考察其专属性、准确度、精密度和范围，具体分点要求如下：

1.专属性：方法能明确区分活细胞与死细胞，通常通过对比染色法（如台盼蓝染色）与另一种公认的参考方法（如流式细胞术结合活/死染色）来确认。

2.准确度：可通过使用已知活率的细胞样品（例如，通过物理方法诱导产生特定比例的死细胞）进行加标回收实验来评估，计算实测值与理论值的偏差。

3.精密度：包括重复性（同一操作员、同一样品、短时间内多次测量）和中间精密度（不同日期、不同操作员、不同计数仪），通常要求相对标准偏差（RSD）在可接受范围内（例如，对于活率>90%的样品，RSD应<5%）。

4.范围：应覆盖工艺中可能出现的活率范围，例如从50%到99%。

以上验证活动应形成书面方案，记录原始数据并得出结论。

二、不同细胞类型需分别开展验证或风险评估确认

必须针对不同的细胞类型分别进行验证或至少进行评估确认。这是因为不同细胞系的细胞大小、形态、膜通透性、染色特性以及对染料的敏感度可能存在差异。例如，悬浮细胞与贴壁细胞经消化后形成的细胞团簇可能影响染料的均匀渗透和计数仪的识别；某些干细胞或原代细胞可能对台盼蓝染料更敏感，导致假阳性（将活细胞判为死细胞）。具体验证执行原则分点如下：

1.对于全新的、与已验证细胞系特性差异巨大的细胞类型，必须进行完整的验证。

2.对于特性相似（如均为CHO悬浮细胞）的不同克隆株，可以通过简化的桥接研究或对比实验来确认方法的适用性。

以上要求符合ICH Q14中基于风险评估和知识管理的理念。材料中关于分析方法变更（如从连续培养细胞变更为冻存细胞）仍需进行部分再验证以证明性能可比性的案例，也佐证了细胞特性变化对方法性能的潜在影响[10,12,13]。

三、细胞活率计数验证频次及周期性持续确认管理要求

细胞活率计数验证不能仅进行一次，初始验证仅确认方法特定条件下的适用性，需建立周期性持续确认和监控体系，契合ICH Q10和ICH Q12基于知识管理和持续工艺确认（CPV）的理念。具体分点管控策略如下：

1.年度回顾驱动再评估：在产品质量回顾或分析方法性能年度回顾中，评估细胞活率检测历史数据，包括OOS/OOT率、精密度趋势、与参考方法对比结果等；若数据出现趋势异常或性能漂移，立即触发调查并启动再验证。

2.持续方法统计过程确认：将活率检测关键参数（仪器自检结果、标准品测试值、对照样品结果）纳入统计过程控制（SPC），通过控制图长期监控检测方法稳定性。

3.变更触发强制再验证/再评估：发生影响检测结果的各类变更时，必须开展再评估或再验证，包括更换计数仪型号或品牌、更新计数仪关键软件、更换活率染料品牌或批次、细胞培养工艺重大变更（改变细胞特性）、方法应用于全新细胞类型等。

4.设备周期性性能再确认：计数仪作为关键测量设备，纳入常态化校准与确认计划；除定期计数体积校准外，每年使用标准微粒或已知活率的稳定细胞样品开展性能确认（PQ），确保仪器硬件及光学系统持续稳定可靠。

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