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创伤弧菌PCR检测试剂盒

英文名称:PCR Detection Kit for Vibrio vulnificus

货 号 :KJD14P

规 格 :24 测试/盒

用途:基于 PCR 技术,并适用于鱼、虾、蟹、贝类等水产品中创伤弧菌的检测。

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产品名称:创伤弧菌 PCR 检测试剂盒
英文名称:PCR Detection Kit for Vibrio vulnificus

产品编号与包装规格:

编号规格
KJD14P24 测试/盒

产品简介:本试剂盒基于 PCR 技术,并适用于鱼、虾、蟹、贝类等水产品中创伤弧菌的检测。

检测原理:利用特异性引物和 PCR 反应所需其他试剂,如反应缓冲液、dNTPs 以及 Taq DNA 聚合酶等,加入待检 DNA 模板样品,即可进行PCR 扩增反应。经比对扩增产物目标条带即可判定创伤弧菌 vvhA 基因。

产品特点:
1. 快速简便:将酶、引物等反应组分混匀后进行干粉化处理,增加试剂稳定性,使用时减少溶液配制步骤,更为便捷,整个检测反应可在 3 h 内完成;
2. 特异性高:按照 GB 4789.44−2020《食品微生物学检验创伤弧菌检验》提供的目标基因引物,保证扩增反应的高度特异性;
3. 判读简单:扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和紫外仪观察目标条带即可判别,直观方便。

创伤弧菌 PCR 检测试剂盒产品组分:

创伤弧菌 PCR 检测试剂盒产品组分

储存条件与保质期:2~8℃条件下储存,有效期为 12 个月。

所需其他材料和适用仪器:
1、PCR 仪器、高速离心机、电泳仪、水平电泳槽、紫外仪、移液器、移液枪头及离心管等;
2、琼脂糖、溴化乙锭(EB)或其他核酸染料。

创伤弧菌 PCR 检测试剂盒使用指南:

1,样品前处理

1) 参照 GB 4789.44−2020,取经 36℃±1℃培养 18 h±1 h 样品 PNCC 增菌液 1 mL 至无4 菌离心管中,12000 r/min 离心 2 min,弃上清,加入 30 μL 裂解液,充分悬浮,转移至 0.2 mL 无菌离心管中,轻弹管壁消除气泡,99℃加热 10 min;

2) 参照 GB 4789.44−2020,挑取可疑菌落半环到含 30 μL 裂解液的无菌离心管中,充分悬浮,轻弹管壁消除气泡,99℃加热10 min。

3) 12000 r/min 离心 15 min,上清即为粗提的 DNA,可转移至 0.2 mL 无菌离心管中,在-20℃下可长期保存。

2, 加样、反应

   1) 首次使用时,分别加入 80 μL 超纯水至阳性对照和阴性对照管中,充分溶解,-20℃存储待用;
   2) 取出干粉试剂,按照需求分别剪取 n 个检测试剂管(n=待检测样品数+1 管阳性对照+1 管阴性对照),每管加入 18 μL 复溶液,充分溶解后待用;
   3) 向上述已加入复溶液的 n 个反应管中分别加入待测样品核酸、阴性对照、阳性对照各 2 μL,紧盖后置于 PCR 仪中按设定的反应程序进行扩增反应;
   4) PCR 反应程序如下:

3, 结果判读:反应后每管中加入 4 μL 6×Loading buffer,混匀,并取 8 μL 经 1.5%琼脂糖凝胶电泳,在紫外仪下观察,阴性对照无条带扩增,阳性对照中出现目标条带(参照图 1),PCR试验结果成立。根据每个样品对应的反应产生的目标条带,即可判断创伤弧菌 vvhA 基因是否检出。若阴阳性对照管反应结果不符,则本次检测结果无效,应重新检测或与产品技术支持联系。