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细菌新型生化鉴定管使用说明
―― 070040 大肠埃希氏菌O157:H7生化鉴定盒（12种×10次）管
一）大肠埃希氏菌O157:H7生化鉴定盒 整套试剂及用品
鉴定生化反应的12种试剂及配套试剂5种（表1）、0.85%无菌生理盐水10瓶、0.5 McFarland的浊度管1瓶、一次性吸管10支。
二）生化管的使用方法
开启西林瓶前，用75%酒精棉消毒西林瓶表面，在无菌条件下，按铝盖上的箭头方向打开铝盖，撕开铝盖，打开西林瓶胶塞（如图1）。所有的西林瓶在使用后均高压灭菌后方可弃去。
三）大肠埃希氏菌O157：H7生化鉴定盒的详细使用方法
将疑是大肠埃希氏菌O157：H7的新鲜菌苔置于已配备的无菌生理盐水中，与0.5 McFarland的浊度管比浊，将菌悬液制备成0.5McFarland ( 约108cfu/mL )， 37℃培养18－24h，用吸管吸取2滴（约0.06mL）菌悬液加入每种微量生化管内。将已接种的西林瓶再套上胶塞，一般采用全加塞（如图2左两瓶所示），特殊情况在下表注明采用半加塞（如图2右两瓶所示），直立于内托的凹槽内（如图2），或放置于合适的瓶架中，于35－37℃培养箱中培养，结果观察见表1。注意：如有特殊的接种方式、培养时间或培养方式，请详见每种生化鉴定管附带的使用说明。
| 表1 | |||||
| 产品名称 | 结果判定 | 培养时间（小时） | 使用说明 | ||
| 阳性 | 阴性 | ||||
| 山梨醇 | 黄色 | 紫色 | 18-24 | ||
| 纤维二糖 | |||||
| 棉子糖 | |||||
| 蛋白胨水 | 红色 | 不变色 | 24 | 培养后加靛基质试剂2-3滴，立即观察结果。 | |
| 西蒙氏柠檬酸盐 | 蓝色 | 不变色 | 24-48 | 西林瓶半加塞(如图2右两瓶所示)用接种针挑取新鲜菌苔在斜面上划“之”字形接种，竖立培育。 | |
| 鸟、赖氨酸脱羧酶 | 试验管蓝绿色，对照管变 | 试验管与对照管均变黄 | 18－24 | 每株被检菌应同时接种氨基酸对照管一支，并加灭菌液体石蜡5-8滴覆盖培养基表面。培养18-24小时，未见阳性结果，继续培养48小时，再做最终结果判定。 | |
| 半固体琼脂 | 扩散生长 | 无扩散生长 | 24-48 | 用接种针挑取新鲜菌苔穿刺接种，竖立培育。 | |
| 三糖铁琼脂 | 产气 | 有气泡 | 无气泡 | 24 | 西林瓶半加塞（如图2右两瓶所示）用接种针挑取新鲜菌苔穿刺，穿刺完毕后在斜面上划“之”字形接种，竖立培育。 |
| 分解蔗糖、（或）乳糖 | 斜面和底层变黄色 | 不变色 | |||
| 分解葡萄糖 | 底层变黄，斜面不变色或者红色加深 | 不变色 | |||
| 产H2S | 变黑色 | 不变色 | |||
| 葡萄糖磷酸盐胨水 | MR | 红色 | 不变色 | 24-48 | 培养后加MR试剂2－3滴，立即观察结果。 |
| VP | 红色 | 不变色 | 48 | 培养后依次加入10滴VP试剂甲液及4滴乙液，混匀，再培养10－20分钟观察结果。 | |
| 备注：本鉴定盒是按照环凯产品目录中的品种成份从左到右的顺序摆放。 | |||||
四）大肠埃希氏菌O157：H7的生化鉴定程序（见下图）和生化鉴定特征（见表2）
凡符合上述大肠埃希氏菌O157：H7生化反应的纯菌落，经用抗E.coli O157：H7标准血清或EHEC O157：H7乳胶凝集试剂测试呈阳性结果，即可报告为该食品试样中检出大肠埃希氏菌O157：H7。
