【产品名称】
通用名称：传染性皮下和造血组织坏死病毒（IHHNV）核酸检测试剂盒（PCR荧光探针法）
【产品简介】
本试剂盒适用于水产样本中传染性皮下和造血组织坏死病毒（IHHNV）的检测。
【检测原理】
基于实时荧光 PCR技术，针对IHHNV特异性基因设计引物和荧光探针并优化反应所需试剂组分，加入待检样品核酸即可进行扩增反应。在扩增过程中，荧光探针与目的基因片段结合，可被Taq酶分解并产生荧光信号，此时荧光定量PCR仪可识别该荧光信号，同时根据其强弱变化绘制出相应的实时扩增曲线，进而判定IHHNV是否检出。
【产品组分】
组分名称 | 规格×数量 |
裂解液 | 1 mL×2管 |
阳性对照 | 200 μL×1管 |
阴性对照 | 200 μL×1管 |
预混液 | 1 mL×1管 |
说明书 | 1份 |
【储存条件与保质期】
-20℃储存，有效期为9个月，避免反复冻融。
【灵敏度】
最低检验限：10-100 Copies/Test
【所需其他材料和适用仪器】
荧光定量PCR仪（具有能够检测FAM标记的荧光通道）、高速离心机、移液器、移液枪头及离心管等。
【使用指南】
1. 样品前处理
取50 mg左右（约黄豆粒大小）的组织样品（对虾鳃、胃及各期虾苗幼体）于玻璃匀浆器中匀浆，匀浆后置于1.5 mL离心管中。
2. DNA提取
1）对上述处理好的样品加入50 μL裂解液，100℃恒温处理10分钟，13000 rpm离心5分钟，上清即含待检测样品DNA。如不立刻开展检测请将上清液转移至0.2 mL无菌离心管中，-20℃保存。
2） DNA的提取也可以采用商品化的水生动物病毒核酸提取试剂盒进行提取，请严格按照试剂盒说明书进行操作。
3. 加样、反应
1) 按照需求取n个PCR反应管（n=待检测样品数+1管阴性对照+1管阳性对照），从试剂盒中取出预混液，充分融化，涡旋振荡后短暂离心，向以上每个PCR管中加入20 μL预混液。
2) 向上述n个反应管中分别按顺序加入阴性对照、待测样品DNA、阳性对照各5 μL，加样后立刻盖紧管盖，短暂离心，立即进行PCR扩增反应。
3) PCR反应体系为25 μL，设置FAM检测通道读取，在反应阶段2中60℃时收集荧光信号，具体程序如下：
反应阶段 | 温度 | 时间 | 信号收集 | 循环数 | |
1 | 95℃ | 30 sec | 1 | ||
2 | 95℃ | 5 sec | 40 | ||
60℃ | 30 sec | √ |
注：对于ABI系列荧光定量PCR仪器，其反应体系中无需添加ROX，且在软件设置时，在“Passive Reference”和“Quencher”处均选择“None”。
4. 结果
一般情况下，可通过软件自动设定的基线、阈值等直接读取检测结果。如需调整，可根据所使用仪器的自身情况（如噪声等）以及选取的不同荧光通道进行调整。
1) 质量控制：
阴性对照未出现明显的S型扩增曲线或Ct值＞37，阳性对照出现S型扩增曲线且其Ct值＜30。若阴阳性对照未同时满足上述条件，则本次检测结果无效，应重新检测或与产品技术支持联系。
2) 结果判读：
① 无Ct值，且未出现典型的S型扩增曲线，为阴性结果，判定为IHHNV未检出；
② Ct值≤37，且出现典型的S型扩增曲线，为阳性结果，判定为IHHNV检出；
③ Ct值＞37，且出现典型的S型扩增曲线，建议重新检测，若重检后Ct值≤37，且出现典型的S型扩增曲线，则判定为阳性结果，反之则为阴性结果。
