中国工程院食品安全院士团队

科研成果转化平台

大家是否确定细胞传代数是什么意思？对如何计算它并跟踪细胞培养物传代数感到困惑？想知道细胞最大传代数是否有上限吗？

我们所说的细胞传代是什么意思？

如果提供足够的空间、营养和环境条件，培养的细胞将呈对数生长。然而，它们达到了一个空间变得有限的地步，如果不采取干预，细胞生长会减慢，细胞会开始死亡。

这就是为什么需要定期检查细胞的汇合度，一旦它们达到约80%的汇合度，需要“分裂”或传代培养细胞。这也称为细胞传代。

那么什么是细胞传代数呢？

细胞传代数只是计算您分流或传代细胞的次数。每次完成该过程时，应该增加传代数 （p number）。传代号通常写在培养箱中的细胞培养瓶或板上，当细胞冷冻时写在冻存管上。这提供了一种简单易行的方法来跟踪通道编号。

为什么我们需要监测和记录细胞传代次数？

永生化细胞系，包括 HeLa、HEK293 和 U2OS 细胞，通常具有遗传不稳定性的特点，使其容易随着时间的推移而变化。此外，培养条件可能会提供选择性压力，导致细胞群随时间发生变化（例如，快速生长的细胞将超过生长缓慢的细胞）。因此，较低细胞传代数（例如，p=3）的细胞组成可能与较高传代细胞（例如，p=40）的细胞组成具有非常不同的特性和行为。原代细胞往往比永生化细胞的遗传稳定性高得多。然而，它们通常在一定数量的细胞传代后会经历衰老，并且仍然会受到选择压力的影响。通过遗传不稳定或选择压力带来的变化可能导致表型变化，并影响细胞对治疗或实验条件的反应。这可能会影响结果的准确性和可重复性。记录传代次数可以跟踪细胞的“年龄”，建议在规定的传代次数后停用细胞，以保持实验的可靠性。此外，还建议在进行任何实验时记录细胞的传代次数，因为这样，如果结果有任何异常，可以考虑传代次数。

细胞的最大传代数是多少？

我们所说的高传代细胞是什么意思？确定细胞的最大传代数类似于询问一根绳子有多长。就理论上可以传代细胞多长时间而言，这取决于细胞系。理论上，永生化细胞系可以无限传代。然而，正如我们上面所讨论的，随着时间的推移，由于遗传不稳定性和选择压力，它们可能会经历表型和种群变化。实际上，应限制细胞传代以防止群体和遗传漂变，理想情况下，应使用相似的传代数进行实验。对于细胞系，没有定义的最大传代次数，但强烈建议保持较低的传代次数。然而，低的含义可能有所不同，一些建议建议将细胞传代次数限制在不超过 10-20 次传代，而医疗保健和制药环境中的一般指南应将传代次数限制在最多 5 次。

关于标记编号的常见问题

我应该从哪个编号开始？如果大家有一种新的细胞培养物，要么来自冷冻库存，要么来自 ATCC 等供应商，要么来自其他实验室。你是否重置标记为第一次传代，或者，也许从P0开始？

无论从何处采购细胞储备液，购买的细胞可能已经经历了多次传代。供应商应告知您所购买的库存的通过编号，可能会发现需要为通过编号为2或更少的库存支付溢价。如果要从实验室的冷冻供应中检索细胞原液或从其他实验室捐赠细胞，则应确保询问细胞的传代次数。

然后，应该从提供的传代编号继续传代数。请注意，从原液中将细胞回收到培养物中的过程不算作一次传代。

如果提供的原液的传代编号为2，那么在最初培养它们的培养瓶上写下的传代编号为2。只有随后对它们进行传代培养时，才会将传代数增加到3。

冻融细胞算作一次传代吗？

上面的图解释了如何从细胞储备液中设置传代数。但是，如果自己冷冻细胞，然后解冻，那么冷冻和解冻细胞的过程算作一次传代吗？让我们再次看一个视觉对象来帮助解释这一点。假设有一个细胞储备板，要将其冷冻以备后用，其传代数为4。

对于贴壁细胞，在准备冷冻细胞之前，需要从板中胰蛋白酶消化（或以某种方式分离细胞）。此步骤是传代培养步骤，这意味着冷冻原液的传代次数应增加1至5。这意味着可以在样品瓶上写下这些原液的 p=5。当第一次回收细胞时，不需要增加这个数字，只需在随后传代它们时增加它们。

如何保持低传代数？

1. 从信誉良好的手机来源购买细胞，例如 ATCC。

从有问题的供应商处购买储液或从其他实验室获得储液意味着可能没有可靠的传代数，因为冷冻和传代培养方案以及传代数分配方式各不相同。

2. 尽早冻结库存。

当您获得并恢复您的种群时，应该传代它们，然后冻结第一轮传代的种群（图 3）。这提供了一组低传代数的库存，当工作库存达到传代上限时，可以返回。

文章来源：环凯转载于“ 智者不学生物”公众号；原标题：“你真的了解细胞代次的意思吗？如何计算细胞传代次数？”；作者~腌制油梨。
转载声明：本文为转载发布，仅为分享学习目的。对转载有异议和删稿要求的原著方，可联络站点客服删除。