细胞培养过程中漂浮物辨析
发布时间：2025-11-26 浏览次数：55
在实验室培养细胞的过程中，显微镜观察视野里出现漂浮物是一个常见的问题，这个情况往往可能是多种原因共同引起的，有时是培养液中的沉淀物，有时是污染物，以下我们就从多个纬度探索这一现象可能存在的原因以及解决办法。
漂浮物的分类
1. 白色点状漂浮物
形成原因：一般是在细胞复苏后的第一天，或者传代后的第一天出现，可能的原因是复苏或传代操作后细胞未完全贴壁，团状聚集形成的细胞团块。
特征：这些漂浮物会随时间延长而膨胀，最终吸收培养基。
处理建议：检查细胞是否贴壁良好，若未贴壁，可能需要调整培养条件或更换培养基。若贴壁细胞形态良好那么这些未贴壁细胞团块可直接去除。
2.类似细沙的漂浮物
可能原因：可能是细菌污染，尤其是当培养基浑浊且漂浮物数量较多的情况。有时也会贴在细胞表面或细胞周围，数量庞大有暴增情况。
特征：在显微镜下可见，但细胞仍能正常生长。长时间培养细胞会出现空泡化老化现象。
处理建议：更换新配制的培养基，或将原培养基0.22μm微孔膜过滤后使用，若问题依旧，需考虑是否为细菌污染，必要时丢弃细胞并进行消毒处理。
3.黄色圆形或椭圆形漂浮物
可能原因：与高糖DMEM培养液中的异常现象有关，可能与培养液成分有关，而非细菌或支原体污染。
特征：比细胞大，但肉眼不可见，未影响细胞生长速度。
处理建议：尝试更换为低糖培养基，观察是否仍有漂浮物出现。
4.白色或浅黄色漂浮物
可能原因：真菌污染，如酵母菌或霉菌，其特征为在培养液中形成白色或浅黄色漂浮物，显微镜下可见菌丝。
特征：菌丝呈丝状、管状或树枝状，可能在细胞间穿行。菌体呈放射状。
处理建议：一旦发现霉菌污染，通常建议弃掉污染细胞，使用制霉菌素或酮康唑处理，并加强培养环境的消毒。
5.黑色小点或圆形漂浮物
可能原因：可能是原虫污染，会有增殖情况，占据细胞生存空间，此消彼长。
特征：细胞培养液仍清亮，但细胞形态异常，生长速度减慢。
处理建议：需立即处理，避免污染扩散。市面上往往尝试使用黑胶虫清除试剂去除，一般使用周期在一周左右，需要反复观察避免去除后再次反复。
6.细胞裂解或碎片化
可能原因：细胞老化、传代次数过多或冷冻保护剂使用不当。
特征：细胞漂浮，可能伴有细胞碎片。
处理建议：使用台盼蓝染色检测细胞活力，必要时更换新鲜培养基。
漂浮物的辨别
a. 显微镜观察
细菌污染：培养液浑浊，显微镜下可见细菌细胞或颗粒。细菌颗粒成熟后会出现快速游走情况。有明显细菌形态球状杆状线状等。
真菌污染：可见菌丝或孢子，呈白色或浅黄色漂浮物。随之污染严重会出现肉眼可见的团状物伴随细胞上清液混浊。
悬浮细胞污染：显微镜下可见其他类型细胞。
b.肉眼辨别培养液颜色和状态
细菌污染：培养液变黄，pH下降，细胞形态变圆。
真菌污染：培养液颜色变黄，但短期内不会浑浊。长期会出现团状菌体。
细胞状态异常：细胞形态不规则，生长速度减慢。
c.检测方法
革兰染色：用于区分细菌类型。
PCR检测：用于检测异种DNA或RNA。可以辨别支原体污染细菌污染等。
染色体分析：用于确认染色体异常。
处理建议
* 预防措施
严格无菌操作：避免微生物污染。
优化培养条件：确保温度、湿度、CO₂浓度适宜。
定期更换培养基：去除代谢废物，提供新鲜营养。
* 处理措施
细菌污染：丢弃污染细胞，使用抗生素处理。
真菌污染：弃掉污染细胞，使用制霉菌素或酮康唑处理。
悬浮细胞污染：使用PCR或染色体分析确认污染，必要时更换细胞。
细胞漂浮：调整细胞密度，改善细胞贴壁条件。
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