如何科学地进行血清批次测试
发布时间：2025-12-23 浏览次数：84
大家都知道，血清是细胞培养中成本最高且最捉摸不定的成分。单单是批次间差异，就可能使细胞形态大变。
图：research gate
1、血清中哪些成分导致了批次差异？
血清不是化学成分确定的调配出来的溶液，而是含有巨多成分的复杂混合物，除去营养成分，其中还有很多具有生物活性的功能性的分子（或者说我们需要的就是这些成分）。
图：research gate
正是这些复杂的成分导致了各厂商、甚至不同产地和批次的血清都有些微不同。这些功能性的分子又可以分为调节和支持两类：
调节：生长因子、抑制因子、激素，如EGF、PDGF、IGF-1、γ-球蛋白、甲状腺激素、甾体激素和残留的抗生素等，将直接影响细胞的增殖速率、分化方向、代谢、部分基因表达和相关通路。
支持：粘附因子、胞外基质蛋白等将影响细胞的贴壁、形态和细胞骨架结构。
2、如何筛选血清、进行测试？
a、形态学观察
在固定时间点（如对数期和平台期）对比细胞大小、铺展形状、伪足及细胞间连接的均一性。确保生长状态和贴壁情况一致。
但除了对细胞的形态特征进行判断，还需要从分子水平对比。
例如在正常培养阶段，提取细胞RNA进行待研究的基因的表达分析，看新血清是否会对该基因的表达产生上调或抑制，如果有，那说明该血清的存在可能会影响你的课题实验的结果准确性。
b、生长曲线法
设置阴性对照（当前使用的批次）和待测批次。以正常培养的浓度，接种相同细胞数，在24、48、72、96小时等时间点检测细胞密度，或记录细胞达到不同的密度所需要用到的时间。
如果细胞使用这一批次的血清时，其生长停滞期的时间较长，说明细胞需要对这个批次的血清进行较长时间的适应后才能正常生长。
如果细胞进入对数增长期后，倍增速度快，也就是长得很快，说明这批次的血清对细胞的生长促进效果很明显。
如果细胞进入平台期后，其密度比以往的血清批次要更高，说明该批次的血清的经济效率更高，反之亦然。
检测手段可以采用自动细胞计数仪，同时记录活细胞数和活率；或使用CCK-8法间接反映细胞数量，将结果绘制成生长曲线。其中尤其需要关注的是对数生长期和细胞活率。
c、克隆形成实验（针对干细胞或转化细胞）
将细胞悬液稀释到极低密度，接种到平板上，培养1~2周后染色计数克隆数。这比生长曲线更能反映血清对单个细胞增殖潜能的支持。
3、如何平稳更换血清？
选定所用的血清后，应尽量避免更换，并适当囤一些同一批次的血清，以减少日后培养时因批次差异产生的影响。
图：merck
但是肯定会有必须要更换血清的时候，此时建议采用梯度替换方法，逐步过渡，以减少对细胞的影响。具体操作如下：
首先，应选择处于对数生长期中期的健康细胞，增殖活性强。
建立过渡培养基：按75:25 → 50:50 → 25:75 → 0:100（旧血清：新血清）的比例，预先混合新旧血清，并用此混合血清配制完全培养基。混合后最好过滤除菌。
在每次变换比例后，特别是前两次，需要格外注意细胞形态、贴壁情况和生长速度。如果出现明显不适应的情况（如大量漂浮、生长停滞这种状态差的表现），应退回上一比例多培养一代。
当细胞在100%新血清培养基中，其生长曲线、形态和关键功能指标与使用原血清时相似，且能稳定维持至少3代以上，就可以认为过渡成功了。
一旦通过测试找到理想批次，就可以囤一些并分装冻存。血清的冻存温度为-20°C或-80°C，一旦解冻就需要尽快使用完。
图：research gate
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