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李斯特氏菌属生化鉴定解决方案
发布时间：2014-12-09 浏览次数：5592 分享：
李斯特氏菌属(Listeria)为一种短小的革兰氏阳性无芽孢杆菌，DNA碱基组成G+C含量为36-38mol%，广泛存在于环境当中，仅部分种对人及动物致病，导致脑膜炎、菌血症和孕妇早产等。在李斯特氏菌属中，单增李斯特氏菌(L. Monocytogenes)是一种重要的病原菌，宿主主要是人和动物。人感染李斯特氏菌99%是食用了单增李斯特菌污染的食品，尤其是即食类的食品。在美国每年大约有2500人患李斯特氏菌病，病死率高达20%-30%。因此，李斯特氏菌的分离和鉴定仍然是当今研究的热点。
从食品或者临床样本分离的李斯特氏菌的鉴定方法主要有API(Analytic Products INC)鉴定系统、罗氏公司的Micro-ID、Biolog和HK-MID-Listeria鉴定系统等。
广东环凯微生物科技有限公司利用101株野生分离株对新型HK-MID-Lister鉴定系统、传统方法、API-Listeria方法进行了评估，鉴定结果见表1。
表1 三种方法鉴定结果的符合率
Table1 The coincidence rate of the three methods
|
Listeria sp. |
HK-MID(株) |
API (株) |
传统方法 (株) |
符合率(%) |
|
|
|
HK-MID和传统方法 |
API和传统方法 |
HK-MID和API |
||||
|
单增生李斯特氏菌 L. monocytogenes |
69 |
67 |
69 |
100 |
97.1 |
97.1 |
|
英诺克李斯特氏菌 L. innocua |
25 |
24 |
25 |
100 |
96.0 |
96.0 |
|
西尔李斯特氏菌 L. seeligeri |
2 |
0 |
2 |
100 |
0.0 |
0.0 |
|
威尔斯李斯特氏菌 L. welshimeri |
3 |
2 |
3 |
100 |
66.7 |
66.7 |
|
格式李斯特氏菌 L. grayi |
2 |
1 |
2 |
100 |
50.0 |
50.0 |
|
合计 |
101 |
94 |
101 |
100 |
93.1 |
93.1 |
从表1中可以得出，与传统方法对李斯特氏菌属的鉴定结果相比较， HK-MID-Listeria和API-Listeria分别达到了100%和93.1%。API-Listeria鉴定比传统方法的鉴定率稍微偏低，具体是API- Listeria对2株单增李斯特氏菌、1株英诺克李斯特氏菌、2株西尔李斯特氏菌、1株威尔李斯特氏菌和1株格式李斯特氏菌不能给出鉴定结果；而传统方法和HK-MID-Listeria对李斯特氏菌的鉴定完全相符。HK-MID-Listeria和API-Listeria鉴定方法之间差异主要是与两种鉴定方法的原理不同引起的。
1、在溶血反应方面
HK-MID- Listeria鉴定系统在鉴定条上，第12孔为空白孔，添加血红素到加有100微升菌悬液的第12 个空的孔中培养，通过是否产生沉淀分层即可判断阴阳性，管底有沉淀结果为阴性即不溶血，反之为阳性即溶血（见图1），因此HK-MID- Listeria的鉴定实验不需要做溶血的补充实验。
API-Listeria “DIM”的反应结果通过颜色变化来判读，阳性反应为橙色, 阴性反应为淡粉色或浅橙色, 由于各种因素的影响，如：添加试剂不稳定等因素，常常会造成反应结为中间色，结果判读比较困难，容易导致误判。API-Listeria鉴定系统的“DIM”的反应并不能完全替代溶血反应，需要补充溶血性试验。
2、HK-MID- Listeria使用操作更方便，结果更快、更可靠
API- Listeria 加样过程中要特别注意不能产生气泡；而HK-MID- Listeria对菌悬液的浓度没有严格的要求，加样更直接（见图1）。HK-MID- Listeria鉴定条上面覆盖有封口薄膜，可以防止在培养过程中液体过度蒸发；API- Listeria需要额外维持湿度的湿室。
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图1 HK-MID- Listeria鉴定系统
API- Listeria鉴定的可疑菌落要求在非选择性平板上生长的纯培养物；而HK-MID- Listeria可以从选择性平板或者显色培养基平板上挑取单菌落进行鉴定，可以提前24h得到鉴定结果。
HK-MID- Listeria鉴定条已通过了国际AOAC 的认证。其鉴定系统中含有的12种生化反应中，有3种特征性反应：七叶苷、阿拉伯糖和海藻糖，这3种生化反应中任意一种为阴性即可判定鉴定的菌株为非李斯特菌属，这3种生化反应可以提高HK-MID- Listeria 鉴定结果的准确性。
3、在数据库方面
API- Listeria鉴定系统对几个菌株不能鉴定其模式菌与其数据库有很大的关系。API- Listeria鉴定系统的数据库主要是根据常见李斯特氏菌和临床分离样本建立的数据库，致使从食品中分离的部分菌株的生化反应模式不包含在API-Listeria的数据库中。
HK-MID- Listeria鉴定系统模式菌数据库是基于从食品、药品和临床诊断等分离的菌株的鉴定来建立的。因此，HK-MID- Listeria鉴定系统更适合应用从食品、药品中分离的李斯特氏菌的鉴定。相对于API- Listeria鉴定系统来说，HK-MID- Listeria鉴定系统的数据库中缺乏环境如土壤等中李斯特氏菌的数据。
总之，HK-MID- Listeria鉴定系统加样方便，每孔滴加100微升左右；可以直接从选择性培养基挑取菌落；不需要补充血平板实验；通过AOAC认证，结果更可靠；整个鉴定过程节约48h。
参考文献：田亮，卢勉飞，林干等，《新型HK-MID-Listeria 生化鉴定系统的鉴定效果评估》，食品研究与开发，2014,35（329）：86-88。
