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HK-MID李斯特氏菌生化鉴定系统在乳与乳制品行业中的应用
发布时间：2014-12-09 浏览次数：4195 分享：
随着人们生活水平的提高，我国乳制品行业也在快速发展，因此乳制品的食品安全日益成为公众关注的焦点。单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)简称单增李斯特菌，是牛奶和乳制品中威胁人类健康的主要病原菌之一，也国际上公认的李斯特菌十个菌株中唯一能引起严重食物中毒的菌株。该菌在冰箱冷藏室内这种较低温度的环境下长时间生长繁殖，对广大的奶制品消费群体产生潜在的健康威胁，因此，必须对其检测加以重视。
广东环凯微生物科技有限公司长期从事微生物控制和检测的相关研究，是我国最早研究、开发食品微生物安全检测产品的厂家之一，对微生物检测试剂有着成熟的研发及生产经验。我公司针对目前乳制品行业及质量监测单位对单增李斯特菌快速检测的需求及情况，特别从英国公司Microgen Bioproducts引进了HK-MID李斯特氏菌生化鉴定系统，使得单增李斯特菌检验方式较之前有很大的改进，使得技术操作人员能更准确、快捷的检测出目标菌。
HK-MID李斯特氏菌生化鉴定系统（也称为Microgen Listeria-ID鉴定系统），相对于传统的生理生化检验， 具有三大特点。
1）操作方便：无需配制溶液或试剂，占用体积小。
2）反应时间短：接种后的鉴定条培养18-24小时后通过肉眼可见的颜色变化记录结果（无需额外添加任何试剂）
3）判定简单快速：无需对照相关书籍或标准进行菌株鉴别判定，通过购买产品后赠送的Microgen鉴定系统软件分析即可得到鉴定结果。
其创新性在于将可疑菌株产生的生化反应与菌种生化反应数据库中的大量菌株的生化反应结果进行对比，依靠统计学原理，对少数由细小表达突变或实验操作因素导致的不确定结果进行合理判断，最终从数据库中调出可能性最大的菌株数据与其进行匹配，避免了传统方法中由菌株因个别实验结果差异导致的结果无法判定。
目前的分子学方法，虽然在操作上十分快速，但判定依据不明确，生物和技术上的变化性直接限制了分子分型方法的可重复性，而这反过来限制了它的分辨力；同时目前成本较高，无法进行推广普及。
每条Microgen Listeria-ID鉴定条包括11份干燥反应底物和1个空管，反应底物主要用来检验培养物对碳水化合物的利用，空管则用于溶血试验。
![\"图1：HK-MID李斯特氏菌生化鉴定系统套盒包含产品\"](\"/UploadFiles/main/Images/2014/12/20141209114540.jpg\")
图1：HK-MID李斯特氏菌生化鉴定系统套盒包含产品
HK-MID李斯特氏菌生化鉴定系统使用方案
以GB 4789.30-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验流程为例（或其他标准的检验流程）,将可疑菌落筛选出后，用TSA-YE平板划线纯化。如下图中的初筛步骤。
![\"图2：GB](\"/UploadFiles/main/Images/2014/12/20141209114649.jpg\")
图2：GB 4789.30-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验流程图
国标中涉及到的培养基及试剂可参考
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乳制品中单核细胞增生李斯特氏菌检验的解决方案（GB 4789.30-2010） |
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http://www.huankai.com/application/detail_105018001005_100000129669192.html |
在对可疑菌株进行纯化后。图2红色方框中的鉴定步骤可用下列鉴定方法进行替代，以达到简化实验，减少工作量的目的。
首先，必须确认可疑菌株为李斯特氏菌属。
1：李斯特氏菌属鉴定（如实验安排合理，可当天观察到结果）
1.1：革兰氏染色实验。
1.2：氧化酶实验。
1.3：触酶（过氧化氢酶）实验
1.4：动力实验（25 ℃和37 ℃）。在图1中初筛步骤划线TSA-YE的同时接种半固体琼脂做动力实验，通过此步，可在后一天协同其他实验共同确定是否是李斯特军属。
如仍然不能确定，可使用李斯特氏菌乳胶凝集试剂进行确定。
上述四个步骤的实验用品不包含在HK-MID李斯特氏菌生化鉴定系统的鉴定条中需另外购置
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货号 |
产品名称 |
规格 |
类别 |
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029010 |
革兰氏染色液 |
10 ml×4瓶 |
盒 |
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029170 |
氧化酶试纸 |
10片/盒 |
盒 |
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029161 |
过氧化氢酶试剂 |
2 mL/支×10 |
盒 |
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026050 |
半固体琼脂 |
250g |
瓶（干粉） |
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075350A |
半固体琼脂 |
10 ml×20支 |
盒（管装） |
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075350 |
半固体琼脂 |
20支 |
盒（西林瓶） |
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HM 48 |
李斯特氏菌乳胶凝集试剂盒 |
50 tests |
盒 |
此五个实验结果：革兰氏阳性短杆菌，氧化酶阴性，触酶阳性，在25℃培养具有动力，但在37℃培养则无动力，可确认其为李斯特氏菌属。之后，使用HK-MID李斯特氏菌生化鉴定系统对对可疑菌进行进一步鉴定。
2：HK-MID李斯特氏菌生化鉴定系统使用方法
2.1：试剂条使用说明
1）菌悬液制备好后，用无菌滴管加4滴（约100微升）菌悬肉汤至每个反应小管；
2）向管12中加入1滴溶血素试剂；
3）用粘性封口膜或鉴定条盖封口，放至35-37℃的培养箱中培养18-24小时。
2.2：结果观察
培养结束后，对应反应结果对照表（说明书背面）读取结果，填写在结果记录报告单上。
注：溶血素实验结果：检查小管的底部，若覆盖着一层清晰的血红细胞，而底部血红细胞层上方呈现透明的溶液结果为阴性 ；若底部无清晰的血红细胞层，上方出现黄褐色的均匀溶液，则结果为阳性。
2.3：软件使用
在鉴定结果记录表中，所有反应都被分配在三元组中（三个反应为一组），每个反应下面均标有对应的数值1、2、4，将每组中阳性反应对应的数值加起来将得到一个四位数，作为信息代码（Octal Code），将这个信息代码输入Microgen鉴定软件系统中，系统将显示出数据库中5个最接近结果的菌种，从而得到鉴定结果。
详细的MID鉴定系统使用方法，参见
总结：使用该鉴定方案，可以从原来的至少2 天（最长4天）的鉴定时间，缩短到1天（总体李斯特氏菌筛选检验的时间由6~10天缩短到5~7天），为企业的生产争取了宝贵的时间。
相关国标下载地址
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GB 4789.30-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验 |
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http://www.huankai.com/Train/HBdetail_105020015_100000035133931.html |
