科研干货 | 养好THP-1细胞的关键
发布时间：2025-01-06 浏览次数：370
为了成功地培养THP-1细胞，以下是一些重要的注意事项：
首先，在培养基的配制上，建议使用1640培养基并加入10%血清或血清替代品，同时添加0.05mM的β-巯基乙醇。对THP-1细胞来说，血清质量的选择非常关键，因此要确保使用高质量的血清或血清替代品，比如XR血清替代品，来提供细胞所需的营养和生长因子。 其次，在培养过程中要注意定期进行液体更换和细胞传代。建议使用非TC处理的培养瓶，并避免频繁的离心操作以减少机械损伤。在换液时，可以采用补液法或半换液法，同时注意维持适当的细胞密度以促进细胞生长。 对于细胞传代，可以选择直接分瓶或离心法，确保细胞均匀并且细胞密度适中。另外，冻存时应使用预先配制的冻存液（例如DMSO）来保存细胞，并注意避免使用无血清冻存液，因为这可能导致细胞失活。 
最后，要特别注意添加β-巯基乙醇到培养基中，因为THP-1细胞对氧化敏感，而β-巯基乙醇可以保护细胞免受氧化应激的损伤，有助于维持细胞内环境稳定。综合来看，选择合适的培养基组分、培养条件和操作方法将有助于养好THP-1细胞并维持其良好的生长状态。
1. 培养基准备
基础培养基：使用RPMI 1640培养基，添加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素双抗。 抗氧化剂：加入0.05mM β-巯基乙醇（β-mercaptoethanol），但由于其不稳定性，建议在使用前新鲜配制。
2. 细胞密度
密度依赖性：THP-1细胞对密度非常敏感，建议保持在5×105到1×106细胞/mL之间。 传代：当细胞密度超过1×106细胞/mL时，需要进行传代。一般1:2传代。
3. 培养条件
酸性环境：THP-1细胞在偏酸性环境中生长较好。当培养基变黄（橘红色）时，可以补充新鲜培养基或进行半换液。 温度和CO2：培养温度保持在37°C，5% CO2环境中。
4. 冻存与复苏
冻存：使用无血清冻存液，细胞密度控制在约5×106细胞/mL。复苏时，150G离心3分钟。 复苏后处理：复苏后48小时内尽量不对细胞进行操作，以便细胞恢复。
5. 常见问题及解决
细胞聚团：这是正常现象，无需吹散。可以轻轻晃动培养瓶或孔板，使细胞均匀分布。 小黑点：可能是污染或细胞碎片。建议更换培养基并观察，如果持续出现，可能需要丢弃培养。
如何检测THP-1细胞的分化状态？
1. 形态学观察
显微镜观察：分化后的THP-1细胞会从悬浮状态变为贴壁状态，细胞形态由圆形变为不规则形态，体积增大，细胞浆疏松，细胞核增大。
2. 表面标志物检测
流式细胞术：使用流式细胞术检测特定的表面标志物，如CD11b和CD14，这些标志物在分化为巨噬细胞后会显著表达。 免疫荧光染色：通过免疫荧光染色检测细胞表面和细胞内的特定蛋白质表达情况。
3. 功能性检测
吞噬能力测试：分化后的巨噬细胞具有吞噬能力，可以通过吞噬荧光微珠或细菌来检测其功能。 酶活性检测：检测分化后细胞的特定酶活性，如酸性磷酸酶活性。
4. 基因表达分析
qPCR：通过定量PCR检测分化相关基因的表达水平，如TNF-α、IL-1β等。 Western Blot：检测分化相关蛋白质的表达水平。
注意事项
1.形态学观察
显微镜观察：分化后的THP-1细胞会从悬浮状态变为贴壁状态，细胞形态由圆形变为不规则形态，体积增大，细胞浆疏松，细胞核增大。
2. 表面标志物检测
流式细胞术：使用流式细胞术检测特定的表面标志物，如CD11b和CD14，这些标志物在分化为巨噬细胞后会显著表达。 免疫荧光染色：通过免疫荧光染色检测细胞表面和细胞内的特定蛋白质表达情况。
3. 功能性检测
吞噬能力测试：分化后的巨噬细胞具有吞噬能力，可以通过吞噬荧光微珠或细菌来检测其功能。 酶活性检测：检测分化后细胞的特定酶活性，如酸性磷酸酶活性。
4. 基因表达分析
qPCR：通过定量PCR检测分化相关基因的表达水平，如TNF-α、IL-1β等。 Western Blot：检测分化相关蛋白质的表达水平。
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