细胞培养技术——细胞培养的器皿与材料
发布时间:2025-11-14 浏览次数:38
体外培养细胞所用的器材品种较多,如培养器皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、漏斗等。培养器皿包括一次性中性硬质玻璃制品、透明光滑的特制塑料制品(如聚苯乙烯材料)和反复使用的器皿。一次性培养器皿使用方便,壁薄、利于观察细胞,减少了清洗带来的额外工作量,但价格较昂贵。也可采用可反复使用的玻璃培养器皿,辅以使用一次性培养器皿。
细胞培养用玻璃器皿(glass vessel)往往由无毒、透明度好的中性硬度玻璃制成。玻璃表面具有亲水性,不用特殊处理,一般细胞就可贴附生长;玻璃的透明度好,便于观察;易于清洗消毒,可反复使用。
俗称玻璃瓶,主要用于配制、储存各种配制好的细胞培养用液和血清,常用的储存瓶包括带翻帽胶塞的盐水瓶和带塑料旋盖的盛液瓶两种,体积一般为500 mL、250 mL或100 mL。
主要用于培养细胞。用于细胞传代培养的培养瓶瓶壁要求高透明度,厚薄均匀平整,以利于细胞贴壁生长和实验人员观察;瓶口大小一致,口径一般不小于1 cm,便于吸管伸入瓶内任何部位。现用的培养瓶瓶盖通常为螺旋盖,既适合封闭式培养,又适合开放或半开放培养。国产培养瓶的规格以容量(mL)表示,进口的培养瓶多以底面积表示。
用于培养、分离、处理组织和细胞、集落形成、单细胞分离、细胞繁殖等工作。
主要分为刻度吸管和无刻度吸管。刻度吸管(也叫长吸管)主要用于吸取和转移液体,常用规格有1 mL、2 mL、5 mL、10 mL等几种。其改良后管上部有球形刻度称改良吸管。无刻度吸管(也称短吸管或滴管)分为直头和弯头两种,除用于吸取、转移液体外,弯头尖吸管还常用于吹打、混匀及传代细胞。
又称“定量吸管”、“吸量管”,是一种量出式仪器,是一根中间有一膨大部分的细长玻璃管,用来准确移取一定体积的液体。其一端为尖嘴状,另一端管颈处刻有一条标线,是所移取准确体积的标志。常用的移液管量程有1 mL、2 mL、5 mL、10 mL、25 mL和50 mL等。通常又把带有刻度的直形玻璃管称为吸量管。常用的吸量管量程有1 mL、2 mL、5 mL、10 mL等。两者所移取的体积通常可精确至0.01 mL。根据所移溶液的体积和要求选择合规格的移液管使用,在滴定分析中准确移取溶液一般使用移液管,反应需控制试液加入量时一般使用吸量管。
离心管是细胞培养中使用最广泛的器皿,主要用于细胞的离心、漂洗及分离。根据用途不同其形态也各异,细胞培养中常用的离心管有大腹式尖底离心管和普通尖底离心管两种。前者常见有50 mL、30 mL、15 mL等规格,后者多见10 mL和5 mL两种。
塑料器皿的优点是透明平坦、无毒、利于细胞生长。该类制品主要为进口物品,一般在消毒灭菌后密封包装,均为一次性的。其中,聚苯乙烯材料由于透光好、强度大和易塑性而成为一次性培养皿(板)等细胞培养耗材的首选材料。细胞培养中常使用的塑料器皿包括各种培养瓶、培养板及培养皿等。
塑料培养瓶均带螺旋帽,螺旋帽包括两种,一种是顶面透气,只适于开放式培养;另一种不透气,既适用于密封培养,又适用于开放式培养,常用规格从10~600 mL不等。
由底板和盖板两部分组成,底板上有圆孔数个,用于单细胞克隆、生长曲线的测定、药物测试和细胞毒性检测等各种检测实验。其优点是节约样本和试剂,可同时测试大量样本,易于无菌操作。根据底板圆孔数目,将培养板分为各种规格,常用的包括144孔、96孔、24孔、12孔、6孔和4孔。
塑料培养皿的形状、用途和规格与玻璃培养皿相同。但并不是所有的塑料培养皿都适于细胞培养。
塑料离心管的优点是透明或者半透明,硬度小。塑料离心管都有管盖,其一是以防样品(尤其是有放射性或强腐蚀性的样品)外泄;其二是防止样品挥发和防止离心管变形。塑料离心管的材质一般是聚乙烯(PE)、聚碳酸酯(PC)、聚丙烯(PP)等,其中聚丙烯制成的离心管性能最好。目前市面上出售的离心管有各种类型,按大小分大型离心管和微量离心管等。其中大型离心管常见规格有50 mL、15 mL、10 mL,微量离心管也叫Eppendorf管,常见规格有0.2 mL、0.5 mL、1.5 mL、2 mL。
细胞培养中需要的材料还有放置吸管进行消毒的吸管筒(玻璃制或不锈钢制),做标记用的记号笔,用于盛放小件物品材料以便消毒的铝制饭盒或储槽,套在吸管顶部的橡胶吸头,封闭各种瓶、管的胶塞或盖子,用于冻存细胞的细胞冻存管或安剖瓶,各种规格的毛刷、吸球、三角瓶、量筒、烧杯、试管、漏斗、注射器和消毒筒;超净工作台上无菌操作时用的酒精灯,供实验人员操作前清洁消毒手使用的盛有酒精或其他消毒液的微型喷壶等。
其中有些材料如量筒、烧杯等还可以是塑料特制的,由于具有方便和不容易损坏等优点,正逐步取代玻璃产品。此外,在解剖、取材、剪切组织时需要的各种器械。常见的有用于解剖动物、分离及切剪组织,制备原代培养的材料手术刀或解剖刀及手术剪或解剖剪(弯剪或直剪);用于将组织材料剪成小块的眼科虹膜小剪;用于持取无菌物品夹持组织的血管钳及组织镊、眼科镊等;用以放置原代培养之组织小块的口腔科探针或代用品。
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